先天性脊柱側(cè)凸比較蛋白質(zhì)組學(xué)研究及以半椎體切除為手術(shù)方式的臨床回顧性研究.pdf

1、先天性脊柱側(cè)凸(Congenital scoliosis，CS)是指胚胎期體節(jié)(somite)發(fā)育過(guò)程受到某些因素影響導(dǎo)致脊椎發(fā)育異常而出現(xiàn)的脊柱畸形。目前對(duì)于CS病因的研究多集中于易感基因的研究，有關(guān)CS蛋白質(zhì)組學(xué)的報(bào)道較少。因此從蛋白質(zhì)水平對(duì)CS進(jìn)行研究可能為CS病因及發(fā)病機(jī)制研究提供新的線索。
　　CS多數(shù)呈進(jìn)展性，需早期手術(shù)干預(yù)。半椎體是導(dǎo)致CS最常見(jiàn)的類(lèi)型。后路半椎體切除術(shù)可以直接去除導(dǎo)致脊柱畸形的原因，取得滿意的術(shù)后及

2、隨訪矯形效果，是目前治療半椎體導(dǎo)致的CS的主要方法。目前文獻(xiàn)表明此類(lèi)手術(shù)仍有一定難度，并發(fā)癥的風(fēng)險(xiǎn)需引起充分的重視。對(duì)后路半椎體切除效果、并發(fā)癥危險(xiǎn)因素的分析及探討并發(fā)癥的預(yù)防策略對(duì)臨床工作有重要意義。
　　目的:
　　第一部分
　　構(gòu)建CS與對(duì)照組差異蛋白質(zhì)組，對(duì)差異蛋白質(zhì)進(jìn)行生物功能分析，探討差異蛋白在CS發(fā)生發(fā)展中的作用。
　　第二部分
　　總結(jié)了我院后路半椎體切除術(shù)的治療效果及并發(fā)癥情況，探討與并發(fā)

3、癥相關(guān)的危險(xiǎn)因素，并在此基礎(chǔ)上尋找減少并發(fā)癥發(fā)生的預(yù)防策略。
　　方法:
　　第一部分
　　1、全骨髓培養(yǎng)法分離并擴(kuò)增CS和對(duì)照組患者M(jìn)SC細(xì)胞，對(duì)擴(kuò)增的MSC細(xì)胞進(jìn)行成骨及成脂肪誘導(dǎo)分化、流式細(xì)胞儀檢測(cè)，驗(yàn)證分離的細(xì)胞為MSC細(xì)胞。
　　2、提取蛋白質(zhì)樣品。采用iTRAQ技術(shù)對(duì)蛋白質(zhì)樣品進(jìn)行定性及定量測(cè)定，構(gòu)建CS及對(duì)照組差異蛋白質(zhì)組。
　　3、采用Meta-core及Panther、KEGG數(shù)據(jù)庫(kù)對(duì)篩選

4、出的差異蛋白進(jìn)行GO分析及Pathway分析，探討差異蛋白在CS發(fā)生及發(fā)展中的作用。
　　4、對(duì)選取的差異蛋白采用Western blotting技術(shù)驗(yàn)證iTRAQ技術(shù)的準(zhǔn)確性。
　　第二部分
　　回顧性分析自2003年1月至2012年1月在我院接受后路半椎體切除手術(shù)的116例先天性脊柱側(cè)凸患者的手術(shù)療效及并發(fā)癥情況，采用單因素分析的方法探討潛在危險(xiǎn)因素與并發(fā)癥之間的關(guān)系，尋找與并發(fā)癥可能相關(guān)的危險(xiǎn)因素，并提出相應(yīng)預(yù)防

5、策略。
　　結(jié)果:
　　第一部分
　　第一章采取全骨髓培養(yǎng)法并通過(guò)成骨及成脂肪分化、流式細(xì)胞儀鑒定確認(rèn)所分離的細(xì)胞為MSC細(xì)胞。
　　第二章首次采用iTRAQ技術(shù)構(gòu)建了CS的比較蛋白質(zhì)數(shù)據(jù)庫(kù)，發(fā)現(xiàn)205個(gè)蛋白差異表達(dá)，其中61個(gè)表達(dá)下調(diào)，144個(gè)表達(dá)上調(diào)。通過(guò)對(duì)差異蛋白的生物信息學(xué)分析及查閱文獻(xiàn)后，本研究選擇了22個(gè)蛋白作為與CS相關(guān)的目標(biāo)蛋白，其中7個(gè)蛋白表現(xiàn)為下調(diào)，15個(gè)蛋白表現(xiàn)為上調(diào)。這些目標(biāo)蛋白主要參與了

6、系統(tǒng)發(fā)育，神經(jīng)系統(tǒng)發(fā)育，解剖結(jié)構(gòu)的形態(tài)發(fā)育等生物學(xué)過(guò)程，并可能通過(guò)參與PI3K-Akt signalingpathway，focal adhesion pathway等通路發(fā)揮作用。
　　第二部分
　　本研究發(fā)現(xiàn)后路半椎體切除可以取得滿意的手術(shù)效果，冠狀面節(jié)段性側(cè)凸術(shù)后矯正率為79.5％，矢狀面節(jié)段性后凸術(shù)后矯正率為75.4％;頭側(cè)及尾側(cè)代償彎自動(dòng)矯正率分別為41.4％及63.4％。共有11例(9.48％)患者發(fā)生并發(fā)癥，包

7、括7例(6.03％)內(nèi)固定相關(guān)并發(fā)癥及4例(3.45％)非內(nèi)固定相關(guān)并發(fā)癥。采用單因素分析對(duì)內(nèi)固定并發(fā)癥及潛在危險(xiǎn)因素進(jìn)行分析后發(fā)現(xiàn)初次手術(shù)時(shí)的年齡(P=0.037)、短節(jié)段融合(P=0.029)或腰段半椎體患者(P=0.016)內(nèi)固定并發(fā)癥的發(fā)生率比其他患者高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。其他危險(xiǎn)因素與內(nèi)固定并發(fā)癥的發(fā)生無(wú)關(guān)。
　　結(jié)論:
　　1.采用全骨髓培養(yǎng)法可以得到純凈的MSC細(xì)胞。應(yīng)用iTRAQ技術(shù)對(duì)CS及對(duì)照組患者蛋白質(zhì)樣

8、品進(jìn)行鑒定分析后共發(fā)現(xiàn)205個(gè)差異蛋白，其中22個(gè)目標(biāo)蛋白可能與CS的發(fā)生及發(fā)展有關(guān)。這些蛋白質(zhì)組學(xué)研究結(jié)果將為我們進(jìn)一步了解CS的病因及發(fā)病機(jī)制提供新的線索。
　　2.后路半椎體切除術(shù)是一種安全有效的治療半椎體導(dǎo)致的CS的手術(shù)方式。但是仍有并發(fā)癥的發(fā)生，其中內(nèi)固定失敗是后路半椎體切除術(shù)最常見(jiàn)的并發(fā)癥，主要危險(xiǎn)因素包括初次手術(shù)時(shí)的年齡、短節(jié)段融合及腰段半椎體。因此，應(yīng)采取有效的措施減少內(nèi)固定相關(guān)并發(fā)癥的發(fā)生，包括術(shù)前的充分評(píng)估、術(shù)