基于Insulin-IGF-1信號通路探討健脾益智法促進(jìn)MCAO大鼠神經(jīng)干細(xì)胞增值分化的機(jī)制研究.pdf

1、本文基于“脾主運(yùn)化”理論角度，從理論和實驗兩個角度研究健脾益智法對缺血性腦卒中的治療作用，豐富“脾主運(yùn)化”理論的科學(xué)內(nèi)涵，探討健脾益智法可能通過能量代謝的角度促進(jìn)神經(jīng)干細(xì)胞增殖，繼續(xù)深化脾腦相關(guān)理論，為中醫(yī)藥臨床防治缺血性腦卒中提供新的思路。理論研究部分，首先對“脾主運(yùn)化”理論的深層內(nèi)涵進(jìn)行研究:完善“脾主運(yùn)化”理論的概念，提出升清降濁是脾主運(yùn)化的重要內(nèi)容、脾胃為樞是脾主運(yùn)化的內(nèi)在動力、運(yùn)谷化營是脾主運(yùn)化的基本生理、藏營運(yùn)營是脾主運(yùn)化的

2、深層氣化;其次，指出“脾藏營充營”和“營舍意主思”是脾主運(yùn)化在脾腦相關(guān)中的作用機(jī)制，脾腦相關(guān)的關(guān)鍵物質(zhì)是脾運(yùn)化水谷，化生的營氣;最后，從脾主運(yùn)化與能量代謝現(xiàn)代應(yīng)用研究的角度探討了脾腦的相關(guān)性。本實驗以MCAO模型（線栓法大鼠大腦中動脈阻斷模型）大鼠為載體，設(shè)立空白組、模型組、中藥組、LY294002組、LY294002+中藥組。每組于術(shù)后按存活時間又分為以下3個亞組，分別為1d、3d、7d。評估各組大鼠術(shù)后2h神經(jīng)缺損情況，判斷是否造模

3、成功。比較各組大鼠的腦梗死體積、血清胰島素的含量。RT-PCR法比較各組大鼠海馬組織中的PI3K、AKT、PTEN的表達(dá)水平，免疫熒光法比較各組大鼠的Brdu、BrdU/GFAP、Brdu/NeuN的表達(dá)水平。結(jié)果顯示，術(shù)后3天，中藥組與LY294002組、LY294002+中藥組比較Brdu免疫熒光陽性細(xì)胞數(shù)明顯增多;術(shù)后7天，LY294002組Brdu免疫熒光陽性細(xì)胞數(shù)明顯少于模型組、中藥組、LY294002+中藥組。提示健脾益智顆

4、粒能促進(jìn)缺血側(cè)神經(jīng)干細(xì)胞的增殖。中藥組大鼠缺血區(qū)BrdU/GFAP雙染陽性細(xì)胞數(shù)較LY294002組、LY294002+中藥組明顯增加，提示健脾益智顆粒能促進(jìn)神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞神經(jīng)的分化。Brdu/NeuN的實驗未見到明顯新生神經(jīng)元，考慮可能是實驗周期太短，神經(jīng)干細(xì)胞向神經(jīng)元分化不明顯。中藥組大鼠海馬AKT、PI3K的基因表達(dá)較LY294002組升高，中藥組PTEN的基因表達(dá)明顯低于LY294002組，提示健脾益智顆粒通過促進(jìn)PI3K/AKT