Caenorhabditis elegans早期胚胎發(fā)育極性相關基因之間的相互作用研究.pdf

1、細胞極性(cell polarity)是多種不同類型細胞的共同特征，對細胞的分化和功能有重要作用。在C.elegans中par基因家族包括par-1到par-6六種基因，除par-2以外，其余幾種在C.elegans、果蠅、哺乳動物中都有同源物存在。par基因的突變會導致受精卵極性以及很多早期不對稱現(xiàn)象消失。除此之外PAR在細胞連接、代謝和癌癥方面也有重要意義。細胞命運決定因子cdc-42在該過程中也有重要作用，但這幾種基因之間的相互作

2、用還不太清楚。本文通過原位雜交、RNAi等方法在mRNA和蛋白水平對幾種基因間的相互作用進行了研究。 通過構(gòu)建發(fā)夾結(jié)構(gòu)形成雙鏈RNA(dsRNA)的方法和雙T7啟動子L4440為載體形成dsRNA的方法進行RNAi載體的構(gòu)建，通過細菌喂食法進行RNAi分析，發(fā)現(xiàn)兩種方法都可以取得較高的干擾率。保證了以后轉(zhuǎn)基因蟲體的RNAi分析結(jié)果。 本文對par基因在mRNA水平和蛋白水平的表達情況進行了分析。通過原位雜交檢測了par基

3、因在mRNA水平基因之間的相互作用，發(fā)現(xiàn)：par-1、par-2、par-3、par-5、par-6的mRNA都在卵母細胞、早期胚胎和雌雄同體成蟲生殖腺中分布。其中par-2和par-4對其它幾種par基因的mRNA表達起到重要的作用，par-2突變導致par-1、par-3、par-6的表達量減少；par-4突變時，par-1、par-5表達量都減少了，但par-2和par-4之間沒有明顯的作用。另外par-5突變的情況下，導致par

4、-1和par-3 mRNA表達量增加。par-3突變也會導致par-2和par-5的表達量改變。par-6突變的情況下，其它幾種par基因的mRNA在約256細胞的胚胎開始，分布發(fā)生改變，由原來的細胞質(zhì)均勻分布變?yōu)楹蠖说木钟蚍钟?，集中在胚胎后端。暗示：par-4對par-1、par-3和par-5 mRNA的表達有促進作用；par-1、par-3與par-5相互抑制，par-1對par-2有抑制作用，par-2是.par-1表達所需。p

5、ar-6抑制par-3和par-5 mRNA的表達，同時par-2對par-6又有明顯的促進作用。 分析PAR-2、PAR-5和：PAR-6的GFP在C.elegans和par突變體中的分布情況，發(fā)現(xiàn)par-1突變的情況下PAR-2：：GFP的后端皮層分布前移，而PAR-6：：GFP的皮層分布消失。在par-2或者par-5突變的情況下，PAR-6的前端皮層不對稱分布消失，在整個皮層中都有分布。同樣par-5、par-6突變的情