胚胎發(fā)育相關(guān)基因—EDAG的誘導(dǎo)表達(dá)及蛋白純化.pdf

1、胚胎發(fā)育相關(guān)基因(EDAG)是新近發(fā)現(xiàn)的造血相關(guān)基因，該基因定位于染色體9q22，是從4月齡人胚胎組織與成年肝組織的差異基因ETS庫(kù)中分離得到的。EDAG基因在人體內(nèi)的表達(dá)具有時(shí)空依賴性：在造血活躍的組織如胎肝、成人骨髓中高表達(dá)，同時(shí)也高表達(dá)于CD34+細(xì)胞及人白血病細(xì)胞系K562中。研究表明EDAG具有惡性轉(zhuǎn)化活性，與維持細(xì)胞的未分化狀態(tài)有關(guān)。最近的轉(zhuǎn)基因小鼠研究表明，在小鼠造血細(xì)胞中過(guò)表達(dá)EDAG可導(dǎo)致造血干細(xì)胞增殖分化紊亂。突出表

2、現(xiàn)在髓系造血增強(qiáng)，淋巴系造血抑制，并出現(xiàn)典型的髓系增生綜合癥，提示EDAG是一種參與造血組織發(fā)育與分化調(diào)控的重要基因。 迄今為止，EDAG調(diào)控造血細(xì)胞增殖、分化及凋亡的分子機(jī)制尚不明確。鑒于EDAG是一種新發(fā)現(xiàn)的基因，目前既無(wú)商品化的蛋白亦無(wú)抗體用于其蛋白水平的研究。成功的構(gòu)建了帶有His標(biāo)簽的pET22b-EDAG及pET28a-EDAG融合表達(dá)載體，并在大腸桿菌BL21(DE3)中誘導(dǎo)出蛋白的表達(dá)。同時(shí)通過(guò)反復(fù)的摸索確定出適