載VEGF和bFGF納米粒子共同修飾的膀胱無細(xì)胞基質(zhì)誘導(dǎo)膀胱再生抑制攣縮的研究.pdf

1、一些先天性畸形及后天膀胱疾病，如神經(jīng)源性膀胱、膀胱外翻、后尿道瓣膜等，最終往往需要進(jìn)行膀胱擴(kuò)大術(shù)。目前臨床上治療的金標(biāo)準(zhǔn)是胃腸膀胱成形術(shù)，然而利用胃腸組織替代膀胱存在一些潛在的并發(fā)癥，如結(jié)石、感染、代謝異常、繼發(fā)腫瘤等。膀胱無細(xì)胞基質(zhì)具有良好的組織相容性，是理想的替代材料。然而單純利用膀胱無細(xì)胞基質(zhì)誘導(dǎo)膀胱再生存在明顯的移植物攣縮現(xiàn)象。早期快速地形成成熟的血管網(wǎng)絡(luò)對(duì)移植物組織化并且維持再生組織細(xì)胞長(zhǎng)期存活就顯得格外重要。目前的研究通過再

2、水化、透明質(zhì)酸、化學(xué)偶聯(lián)等方式將外源性生長(zhǎng)因子導(dǎo)入無細(xì)胞基質(zhì)中，通過釋放的生長(zhǎng)因子促進(jìn)再生組織血管化。但是導(dǎo)入的生長(zhǎng)因子只能在有限的時(shí)間（2-3周）內(nèi)持續(xù)釋放或發(fā)揮作用，4周后再無生長(zhǎng)因子釋放，凸顯了誘導(dǎo)組織再生能力不足的問題。載藥納米技術(shù)是近幾年新興的藥物緩釋技術(shù)。將載藥的納米粒子與膀胱無細(xì)胞基質(zhì)復(fù)合，有望解決生長(zhǎng)因子在體內(nèi)長(zhǎng)效緩釋的問題，促進(jìn)膀胱再生，達(dá)到抑制移植物攣縮的目的。
　　本研究主要內(nèi)容包括：⑴采用物理、化學(xué)及酶消化

3、法，制備了豬膀胱無細(xì)胞基質(zhì)。經(jīng)過脫細(xì)胞處理后，數(shù)碼相機(jī)拍照，進(jìn)行大體標(biāo)本觀察。在掃描電鏡下，觀察無細(xì)胞基質(zhì)超微結(jié)構(gòu)，評(píng)價(jià)脫細(xì)胞程度及有無細(xì)胞殘留。結(jié)果表明，本研究制備的無細(xì)胞基質(zhì)，呈白色半透明狀，表面光滑，具有一定的彈性和韌性，掃描電鏡未發(fā)現(xiàn)細(xì)胞及碎片殘留，可應(yīng)用于膀胱替代研究。⑵通過經(jīng)典的雙乳化旋蒸技術(shù)成功制備了分別包封VEGF和bFGF的PLGA納米粒子。通過激光粒度儀分析載藥納米粒子粒徑分布，掃描電鏡觀察粒徑大小及形貌特點(diǎn)。利用溫

4、敏凝膠將載藥納米粒子嵌入膀胱無細(xì)胞基質(zhì)中，考察VEGF和bFGF在體外的緩釋特性。結(jié)果表明，載VEGF和bFGF的納米粒子在體外2個(gè)月內(nèi)持續(xù)釋放VEGF和bFGF達(dá)到60-70％，實(shí)現(xiàn)了長(zhǎng)效緩釋的目的。⑶通過乳酸脫氫酶細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)評(píng)價(jià)載蛋白納米粒子對(duì)人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞的毒性，結(jié)果證明納米粒子對(duì)細(xì)胞無明顯的毒性作用。通過CCK-8細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)測(cè)定經(jīng)載蛋白納米粒子處理后的細(xì)胞活力，結(jié)果證明在細(xì)胞培養(yǎng)24h、48h和72h后，載蛋白納米粒子組（

5、VEGF+bFGF納米粒子組、VEGF納米粒子組、bFGF納米粒子組）比非加蛋白組（空白納米粒子組、單純BAM組）表現(xiàn)較高的細(xì)胞活力。根據(jù)western blot結(jié)果，VEGF+bFGF納米粒子組的PCNA表達(dá)量顯著高于其他各組。體外細(xì)胞實(shí)驗(yàn)證明，載蛋白納米緩釋體系無毒性，長(zhǎng)效緩釋的生長(zhǎng)因子具有生物學(xué)活性。⑷長(zhǎng)期緩釋VEGF和bFGF的膀胱無細(xì)胞基質(zhì)大面積（2cm×3cm）替代兔膀胱，評(píng)價(jià)術(shù)后4周和12周時(shí)膀胱的再生情況，測(cè)定移植物攣縮