小鼠基質(zhì)細(xì)胞誘導(dǎo)的人臍血單核細(xì)胞抗腎癌和膀胱癌的初步研究.pdf

1、目的:
　　近年來(lái)的研究發(fā)現(xiàn)，臍血作為一種尚未很好利用和開(kāi)發(fā)的血源，其來(lái)源豐富，富含多種免疫細(xì)胞和干細(xì)胞，易于分離獲得。我們嘗試用小鼠基質(zhì)細(xì)胞誘導(dǎo)的方法建立具有較強(qiáng)細(xì)胞毒活性的人臍源單核細(xì)胞株。體外評(píng)估其抗腎細(xì)胞癌和膀胱尿路上皮細(xì)胞癌的效果。探討腎細(xì)胞癌、膀胱尿路上皮癌過(guò)繼性免疫治療的新方法。
　　方法:
　　臍血單核細(xì)胞來(lái)源于健康孕婦的臍血。淋巴細(xì)胞密度梯度離心法分離得到臍帶血單個(gè)核細(xì)胞。臍帶血單個(gè)核細(xì)胞（3×106

2、個(gè)）與一層預(yù)先在六孔板培養(yǎng)過(guò)夜的小鼠骨髓基質(zhì)細(xì)胞OP9共培養(yǎng)以誘導(dǎo)。1-2周后，轉(zhuǎn)移懸浮的細(xì)胞到新的基質(zhì)細(xì)胞層繼續(xù)培養(yǎng)一個(gè)月或更長(zhǎng)時(shí)間以觀察到大量增殖的胚芽樣細(xì)胞出現(xiàn)，即為小鼠基質(zhì)細(xì)胞激活的單核細(xì)胞(mouse stromal cell activated cord blood monocyte，MSCACBM)。用人重組IL-2(human recombinant interlukin-2，rhIL-2)誘導(dǎo)獲得的臍血單核細(xì)胞，即淋巴

3、因子激活的臍血單核細(xì)胞(lymphokine activated cordblood monocyte，LACBM)和未進(jìn)行誘導(dǎo)的臍帶血單核細(xì)胞(cord bloodmonocyte，CBM)作為對(duì)照。相差顯微鏡觀察細(xì)胞形態(tài)變化。流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)在這三種效應(yīng)細(xì)胞中CD4、CD8淋巴細(xì)胞亞群和CD57 NK細(xì)胞的數(shù)量和比例。MTT法檢測(cè)三種效應(yīng)細(xì)胞對(duì)腎細(xì)胞癌OS-RC-2細(xì)胞和膀胱尿路上皮癌T24細(xì)胞的細(xì)胞毒活性。
　　結(jié)果:

4、　　臍帶血單核細(xì)胞與小鼠骨髓基質(zhì)細(xì)胞OP9共培養(yǎng)1月余，可見(jiàn)大量的幼稚胚芽樣新生細(xì)胞。流式細(xì)胞術(shù)的結(jié)果顯示，在小鼠基質(zhì)細(xì)胞誘導(dǎo)的單核細(xì)胞中，CD4+為30.4±2.12％、CD8+為51.3±4.93％、CD57+為2.8±0.43％;而rhIL-2誘導(dǎo)的LACBM中CD4+、CD8+和CD57+分別為51.2±2.73％，19.2±1.27％和20.2±1.61％;而在CBM中則分別為52.8±5.10％、11.4±2.76％和10.

5、5±1.42％。統(tǒng)計(jì)學(xué)分析結(jié)果表明小鼠基質(zhì)細(xì)胞主要誘導(dǎo)CD8+淋巴細(xì)胞增殖;而rhIL-2主要誘導(dǎo)CD4+淋巴細(xì)胞和NK細(xì)胞增殖。MTT結(jié)果顯示，CBM對(duì)腎細(xì)胞癌和膀胱尿路上皮癌的細(xì)胞毒活性較差。rhIL-2和小鼠基質(zhì)細(xì)胞誘導(dǎo)后能增加單核細(xì)胞對(duì)腫瘤細(xì)胞的細(xì)胞毒作用。但與LACBM相比，小鼠基質(zhì)細(xì)胞誘導(dǎo)的人臍血單核細(xì)胞有更強(qiáng)的抗腫瘤能力。與尿路上皮癌細(xì)胞相比，小鼠基質(zhì)細(xì)胞誘導(dǎo)的單核細(xì)胞對(duì)腎細(xì)胞癌有更的細(xì)胞毒活性(P＜0.01)。