木瓜凝乳蛋白酶的酶學(xué)性質(zhì)及體內(nèi)外溶核作用的研究.pdf

1、木瓜凝乳蛋白酶(Chymopapain簡(jiǎn)稱CHP)是木瓜蛋白酶超家族的一種特殊蛋白酶,主要存在于未成熟的木瓜乳汁中.它可用于治療腰椎間盤(pán)突出癥、Rh血型的鑒定、腫瘤的輔助治療、消炎、細(xì)胞分離以及啤酒的澄清和奶酪的制造等.木瓜凝乳蛋白酶的分離純化很困難,作為蛋白酶對(duì)其性質(zhì)缺乏深入細(xì)致的研究,對(duì)于其治療腰椎間盤(pán)突出癥的藥理機(jī)制還存在爭(zhēng)議.為了深入細(xì)致得了解木瓜凝乳蛋白酶的性質(zhì)及其治療腰椎間盤(pán)突出癥的治療機(jī)理、安全性,該論文研究了以酪蛋白和軟

2、骨蛋白多糖為底物的木瓜凝乳蛋白酶部分酶學(xué)性質(zhì)及其體內(nèi)外溶核作用.采用陽(yáng)離子交換樹(shù)脂Macro-Prep High S Support作介質(zhì)、pH7.0的磷酸緩沖溶液作為洗脫介質(zhì),利用各蛋白酶的等電點(diǎn)不同進(jìn)行離子交換層析,得到了木瓜凝乳蛋白酶的電泳純產(chǎn)品.此分離方法易于操作,結(jié)果穩(wěn)定,重現(xiàn)性好.以酪蛋白為水解底物,木瓜凝乳蛋白酶在pH為7.0時(shí),其最適反應(yīng)溫度為80℃;在溫度為37℃時(shí),其最適pH為3~5.當(dāng)pH為7.0時(shí)、反應(yīng)溫度為37

3、℃時(shí),木瓜凝乳蛋白酶的K<,m>值為1.25g/L,V<,max>為0.1g/(min·L).低濃度的NaCl、Ca<'2+>和葡萄糖對(duì)木瓜凝乳蛋白酶都有激活作用,而鹽酸胍對(duì)其有抑制作用.以軟骨蛋白多糖為水解底物,木瓜凝乳蛋白酶在pH為7.0時(shí),其最適反應(yīng)溫度為60℃;在溫度為37℃時(shí),最適pH為7.0.當(dāng)pH為7.0、反應(yīng)溫度為37℃時(shí),木瓜凝乳蛋白酶的K<,m>值為11.11g/L,V<,max>為0.03g/(min·L).一定濃

4、度下的NaCl和Ca<'2+>對(duì)木瓜凝乳蛋白酶均有激活作用.木瓜凝乳蛋白酶在體外能很好的水解人體髓核.在前4小時(shí)其水解髓核的速度較快,隨后趨于穩(wěn)定.木瓜凝乳蛋白酶在體內(nèi)可以有效溶解髓核.當(dāng)木瓜凝乳蛋白酶注射至大耳兔腰椎間盤(pán)內(nèi),X線學(xué)和組織學(xué)觀察發(fā)現(xiàn):1周后髓核結(jié)構(gòu)破壞,椎間隙的高度減小不顯著,4周后髓核被纖維軟骨替代,椎間隙明顯狹窄.但將其注入椎旁肌可造成組織壞死.因此為了臨床使用的安全,應(yīng)將木瓜凝乳蛋白酶準(zhǔn)確注射至椎間盤(pán)內(nèi).該論文通過(guò)