ST6Gal--I在肺癌惡性表型和化療藥物敏感性中的作用及分子機(jī)制研究.pdf

1、癌癥是當(dāng)今社會(huì)第二大致死性疾病，嚴(yán)重威脅著人們的生命和健康。據(jù)最新的報(bào)道表明，肺癌在男性和女性的發(fā)病率都占癌癥的第二位，而死亡率更是高居第一。根據(jù)肺癌的組織學(xué)類型分類，肺癌可以分為：小細(xì)胞肺癌和非小細(xì)胞肺癌。其中，手術(shù)切除是目前非小細(xì)胞肺癌的主要治療手段，但即使被完整切除，患者仍有很大的幾率出現(xiàn)非小細(xì)胞肺癌新發(fā)腫瘤，因此從分子水平深入研究肺癌發(fā)生發(fā)展的分子機(jī)理，尋找合適的早期診斷和治療靶點(diǎn)，也是目前研究的攻關(guān)重點(diǎn)。
　　唾液酸(s

2、ialic acid，SA)屬于一種帶負(fù)電荷的九碳單糖家族，廣泛分布于真核生物細(xì)胞糖復(fù)合物的最外層，它又可以分為兩種亞型結(jié)構(gòu)即Nec5Ac和Nec5Gc。根據(jù)唾液酸的連接方式可將唾液酸分為α2，3-SA、α2，6-SA及α2，8-SA三大類，唾液酸由唾液酸轉(zhuǎn)移酶催化合成，唾液酸轉(zhuǎn)移酶根據(jù)唾液酸的連接方式可以分為四個(gè)家族，即ST6Gal家族(α2-6連接)、ST3Gal家族(α2-3連接)、ST6GalNAc家族(α2-6連接)和ST8S

3、ia家族(α2-8連接)。其中，ST6Gal-Ⅰ能夠催化唾液酸通過α2，6-連接方式轉(zhuǎn)移到糖鏈末端的半乳糖殘基上。據(jù)已有的研究表明，人體大部分組織都表達(dá)ST6Gal-Ⅰ，然而，組織之間的表達(dá)水平差異很大，并且在許多腫瘤的發(fā)生發(fā)展過程中常伴隨著ST6Gal-Ⅰ表達(dá)水平的改變。如，Jung YR et al指出，下調(diào)ST6Gal-Ⅰ的表達(dá)能夠通過抑制KAI1活性提高直腸癌細(xì)胞的轉(zhuǎn)移能力，本實(shí)驗(yàn)室前期研究表明，ST6Gal-Ⅰ能夠促進(jìn)肝癌細(xì)胞

4、和前列腺癌細(xì)胞的腫瘤進(jìn)展，可以作為肝癌細(xì)胞和前列腺癌細(xì)胞的預(yù)后靶標(biāo)。然而，ST6Gal-Ⅰ在肺癌中的作用及機(jī)制研究尚少。因此，本課題主要研究ST6Gal-Ⅰ在肺癌細(xì)胞生長(zhǎng)、增殖、遷移、侵襲以及化療藥物敏感性中的作用及分子機(jī)制。
　　目的：分析ST6Gal-Ⅰ在肺癌組織表達(dá)水平及臨床意義;研究ST6Gal-Ⅰ表達(dá)改變對(duì)肺癌細(xì)胞生長(zhǎng)、遷移和侵襲的影響及機(jī)制;探討ST6Gal-Ⅰ在肺癌對(duì)化療藥物敏感性的作用及機(jī)制研究。
　　方法：

5、利用免疫組化、Western-blot等方法分析ST6Gal-Ⅰ在肺癌組織表達(dá)水平及臨床意義;利用Real-time PCR和Western-blot等方法檢測(cè)ST6Gal-Ⅰ在人正常肺細(xì)胞(HBE、HLF)和肺癌細(xì)胞(A549、H1299)中的表達(dá)差異;使用ST6Gal-Ⅰ-shRNA轉(zhuǎn)染肺癌細(xì)胞下調(diào)ST6Gal-Ⅰ在肺癌細(xì)胞A549與H1299中的表達(dá);利用體外實(shí)驗(yàn)如CCK8、細(xì)胞平板克隆、劃痕和Transwell以及體內(nèi)裸鼠成瘤實(shí)

6、驗(yàn)等來(lái)分析ST6Gal-Ⅰ下調(diào)對(duì)肺癌細(xì)胞惡性表型的影響，并用Western-blot分析其分子機(jī)制;利用CCK8、流式、DAPI和Western-blot等方法分析下調(diào)ST6Gal-Ⅰ對(duì)肺癌細(xì)胞藥物敏感性的影響及其分子機(jī)制。
　　結(jié)果：ST6Gal-Ⅰ在肺癌組織中的表達(dá)明顯高于正常肺組織;ST6Gal-Ⅰ在肺癌細(xì)胞(A549、H1299)中的表達(dá)明顯高于正常肺細(xì)胞(HBE、HLF);下調(diào)ST6Gal-Ⅰ的肺癌細(xì)胞株A549和H12

7、99，其增殖、遷移及侵襲能力明顯降低;肺癌細(xì)胞株A549和H1299ST6Gal-Ⅰ表達(dá)下調(diào)引起Notch1/MMPs信號(hào)通路蛋白表達(dá)的明顯降低;體內(nèi)實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，下調(diào)ST6Gal-Ⅰ肺癌細(xì)胞株A549其在小鼠體內(nèi)生長(zhǎng)的腫瘤體積和質(zhì)量都較小，并且其Notch1/MMPs信號(hào)通路蛋白的表達(dá)也明顯低于對(duì)照組;下調(diào)ST6Gal-Ⅰ肺癌細(xì)胞系A(chǔ)549和H1299的藥物敏感性明顯增強(qiáng)并伴隨著凋亡通路蛋白P-Rafl、P-JNK、P-c-Jun和c