家蠶蛹期Hgh-like蛋白的純化和鑒定.pdf

1、人生長(zhǎng)激素(Human Growm Hormone,hGH)是一種多肽類激素,由人腦垂體前葉嗜酸性細(xì)胞分泌,是一種非糖基化的親水性單鏈球蛋白。hGH通過(guò)與細(xì)胞膜表面的hGH受體結(jié)合行使其生物學(xué)功能,促進(jìn)蛋白質(zhì)合成和組織生長(zhǎng)、調(diào)節(jié)新陳代謝和機(jī)體免疫功能,是人體多種代謝途徑的重要調(diào)節(jié)因子,在人體內(nèi)起著重要作用。我們?cè)诩倚Q蛹期蛋白中發(fā)現(xiàn)一種能與hGH抗體結(jié)合的天然蛋白,其表觀分子量約為30kD,并通過(guò)Western Blotting檢測(cè)和免疫

2、沉淀的方法確認(rèn)該蛋白的存在,將其命名為hGH-like蛋白。本課題主要研究家蠶蛹期蛋白中hGH-like蛋白的分離純化和鑒定,并為進(jìn)一步研究該蛋白的結(jié)構(gòu)和生物學(xué)功能奠定基礎(chǔ)。
　　 本文以家蠶蛹凍干粉為原料,經(jīng)過(guò)勻漿、過(guò)濾、離心、硫酸銨分段沉淀、超濾對(duì)家蠶蛹蛋白進(jìn)行初步分離,然后經(jīng)脫鹽、凍干進(jìn)行濃縮和保存。經(jīng)過(guò)初步分離的蛋白樣品采用免疫沉淀、親和層析的方法進(jìn)一步純化。再經(jīng)過(guò)雙向電泳進(jìn)一步分離后,進(jìn)行MALDI-TOF質(zhì)譜分析獲得

3、該蛋白的肽質(zhì)量指紋圖譜(Peptide Mass Fingerprinting,PMF),利用PLGS Browser搜索家蠶蛋白質(zhì)理論數(shù)據(jù)庫(kù)分析鑒定純化出的蛋白質(zhì),搜索結(jié)果有三個(gè)蛋白有可能是hGH-like蛋白或與其有相互作用的蛋白,在西南農(nóng)大家蠶理論蛋白庫(kù)中的編號(hào)分別為Bmb019519、Bmb021419和Bmb027808。 鑒于hGH的重要生物學(xué)功能和家蠶完全變態(tài)生長(zhǎng)的特點(diǎn),家蠶蛹中hGH-like蛋白的研究或具有重要的生物學(xué)