Gal4-UAS轉(zhuǎn)基因系統(tǒng)表達BmKIT3R對家蠶蛹期發(fā)育的影響.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、家蠶(Bombyx mori Linnaeus)的蛹期在實際生產(chǎn)生活中,一般維持在兩周左右,但是通過延長蛹期,可以節(jié)約大量花費在鮮繭加工過程中的人力物力。本文旨在利用Gal4/UAS酵母雙雜交系統(tǒng),蛹期特異性表達啟動子介導(dǎo),控制東亞鉗蝎毒素基因(BmKIT3R,Chinese scorpion Buthus martensii Karsch)特異性地在家蠶蛹期表達。Gal4蛋白由蛹期特異性表達啟動子,家蠶翅原基細胞蛋白BmWCP4(B.

2、mori wing-cuticle protein gene)或家蠶溶繭酶PDP(B.mori cocoonase gene)控制;BmKIT3R基因由可以被Gal4蛋白特異性識別的UAS(cis-acting element)序列控制表達,雙元系統(tǒng)的激活系統(tǒng)和效應(yīng)系統(tǒng)都裝載在piggBac轉(zhuǎn)座子載體上。piggyBac載體中含有由家蠶多角體病毒BmNPV ie-1(Bombyx mori nucleopolyhedrovirus im

3、mediate-early gene)極早期基因啟動子控制的新霉素抗性基因(neomycin-resistance gene,neo),以及家蠶A3(B. mori actin3)基因啟動子控制的綠色熒光蛋白基因(green fluorescent protein gene,gfp)。載體被精子介導(dǎo)法導(dǎo)入家蠶受精卵,經(jīng)綠色熒光蛋白觀察和G418篩選,制得轉(zhuǎn)基因家蠶。經(jīng)傳代后提取家蠶基因組,用PCR驗證家蠶基因組中存在gfp與neo基因。

4、雙元系統(tǒng)雜交種的幼蟲與對照組Gal4ˉ和UASˉ的種系相同,并無發(fā)育滯緩的情況,而在蛹期,前者因雙元系統(tǒng)控制的BmKIT3R基因的表達,有些在蛹期死亡,有些蛹期發(fā)育遲緩,而對照組正常發(fā)育化蛾。并且,在Gal4/UAS雙元系統(tǒng)中,BmWCP4的啟動效果在試驗中優(yōu)于PDP的啟動效果。雙元系統(tǒng)雜交種UAS-BmKIT3R(3-247)×BmWCP4-Gal4(大造),UAS-BmKIT3R(3-247)×PDP-Gal4(3-166)和UAS

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