FOXP3和IL-23-IL-17A信號(hào)通路對(duì)慢性乙肝的作用研究.pdf

1、目的：慢性乙型肝炎已經(jīng)成為了一個(gè)全球性的健康問(wèn)題，目前全世界已經(jīng)有超過(guò)3.5億人受累及。乙型肝炎病毒慢性感染的免疫機(jī)制研究在近幾年成為了研究熱點(diǎn)，尤其是Treg細(xì)胞在慢性乙肝中的作用越來(lái)越受到了關(guān)注。FOXP3蛋白在介導(dǎo)炎癥反應(yīng)中起重要作用，并能夠抑制白介素-23/白介素-17A(IL-23/IL-17A)信號(hào)通路的活性。已有研究表明，調(diào)節(jié)性T細(xì)胞(FOXP3+Treg細(xì)胞)和產(chǎn)生IL-17A的輔助性T細(xì)胞(Th17細(xì)胞)分別在乙型肝炎

2、中起重要作用。Treg細(xì)胞和Th17細(xì)胞從起源上就存在著密不可分的關(guān)系，那么在慢性乙肝感染過(guò)程中，Treg細(xì)胞與Th17細(xì)胞的的重要信號(hào)途徑IL-23/IL-17A 途徑之間是否存在相互作用，目前尚不可知。在本課題中，我們擬闡述FOXP3+Treg細(xì)胞及IL-23/IL-17A分泌途徑在乙型肝炎中的作用以及二者之間在乙肝中的相互關(guān)系。
　　 方法：收集24例正常人(HC)、56例慢性乙肝患者(CHB)及39例慢性乙肝急性發(fā)作患者

3、(ACLF)的外周血及肝組織。另外收集了38例慢性乙肝患者經(jīng)替比夫定治療52周過(guò)程中的5個(gè)時(shí)相點(diǎn)的外周血。流式細(xì)胞術(shù)(FCM)檢測(cè)FOXP3+CD4+T細(xì)胞及IL-17A+CD4+T細(xì)胞頻率在HC、CHB及ACLF患者外周血中的變化；采用實(shí)時(shí)定量PCR(Q-PCR)、ELISA及Western blot技術(shù)檢測(cè)肝組織及外周血中的FOXP3及IL-23/IL-17A信號(hào)途徑相關(guān)炎癥因子的表達(dá)，免疫組化及熒光共聚焦檢測(cè)FOXP3在肝組織內(nèi)的

4、表達(dá)與定位，Q-PCR 檢測(cè)血清HBV DNA水平，ELISA 檢測(cè)血清中乙肝表面抗原(HBsAg)濃度及Th17細(xì)胞相關(guān)細(xì)胞因子，全自動(dòng)生化儀檢測(cè)血清中丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(ALT)水平。
　　 結(jié)果：CHB患者外周血中的FOXP3 mRNA表達(dá)水平及FOXP3+CD4+T細(xì)胞頻率明顯高于正常人。FOXP3 主要表達(dá)在CD4+T細(xì)胞上。肝組織內(nèi)的FOXP3 mRNA水平在CHB組及ACLF組中也明顯高于HC組，且與患者血清中的HB

5、V DNA水平及乙肝表面抗原(HBsAg)濃度明顯呈正相關(guān)。在替比夫定治療慢性乙肝的52周過(guò)程中，F(xiàn)OXP3 mRNA的表達(dá)水平在治療的前12周快速下降，之后隨著治療的繼續(xù)而緩慢回升。與HC組相比，CHB患者外周血中的IL-17A+CD4+T細(xì)胞頻率及肝臟內(nèi)的IL-23/IL-17A信號(hào)通路相關(guān)的促炎因子也明顯升高，產(chǎn)生IL-17A的CD4+T細(xì)胞同時(shí)表達(dá)IL-23 受體。當(dāng)患者血清中的HBsAg濃度高于1×104 IU/ml時(shí)，IL-

6、23/IL-17A的表達(dá)與HBsAg 明顯正相關(guān)。CHB患者肝臟內(nèi)FOXP3 mRNA表達(dá)水平升高與IL-23/IL-17A及其相關(guān)炎癥因子的表達(dá)呈正相關(guān)關(guān)系。在慢性乙肝患者經(jīng)替比夫定治療的52周過(guò)程中，乙肝患者外周血中的HBV DNA 病毒載量及HBsAg水平急劇下降，其IL-23/IL-17A的表達(dá)也呈持續(xù)性逐步下降趨勢(shì)，與FOXP3 mRNA的變化趨勢(shì)在治療的前12周相似，但在治療的中后期，二者卻是相反的變化趨勢(shì)。
　　

7、結(jié)論：在未經(jīng)治療的慢性乙肝感染中，患者體內(nèi)FOXP3 mRNA 明顯高表達(dá)，而在替比夫定治療之后，F(xiàn)OXP3 mRNA 則快速下降，這些結(jié)果說(shuō)明了增多的FOXP3+Treg細(xì)胞抑制了肝臟內(nèi)的有效的抗病毒免疫，維持了HBV 病毒在體內(nèi)的持續(xù)性感染。替比夫定治療的中后期，F(xiàn)OXP3 mRNA 緩慢回升，這可能是Treg細(xì)胞與恢復(fù)的抗病毒免疫之間保持的一種平衡，避免過(guò)激的抗病毒免疫繼續(xù)損傷肝細(xì)胞。
　　 IL-23/IL-17A信號(hào)通

8、路的活性在CHB及ACLF中明顯升高，且在替比夫定治療的52周過(guò)程中，呈持續(xù)性下降，證明了Th17細(xì)胞在慢性乙肝的致炎過(guò)程中起重要作用。血清HBsAg在達(dá)到一定濃度時(shí)，能夠誘導(dǎo)IL-23和IL-17A的產(chǎn)生，加劇了肝臟內(nèi)的炎癥程度。HBV 感染的肝組織內(nèi)FOXP3 mRNA的高表達(dá)與IL-23/IL-17A信號(hào)通路的活性升高呈明顯的正相關(guān)關(guān)系，這個(gè)結(jié)果說(shuō)明了，在乙肝的慢性感染過(guò)程中，Treg細(xì)胞的抑制功能可能不足以有效地抑制IL-23/