硫化氫對大鼠腸缺血再灌注后回腸收縮活性和腸神經(jīng)的保護作用.pdf

1、研究目的：腸缺血再灌注（ischemia-reperfusion，I/R）損傷可在出血性休克、小腸移植、機械性梗阻和嚴重外傷等過程中發(fā)生，可引起小腸收縮活力降低、微血管通透性升高和腸黏膜屏障功能下降，并可引起腸道細菌移位進而導致多臟器功能衰竭綜合征。腸缺血再灌注可通過引起腸神經(jīng)元、平滑肌細胞、CajAl間質(zhì)細胞（interstitiAlcells of Cajal,ICC）的凋亡而引起小腸運動功能障礙，尤其是腸神經(jīng)系統(tǒng)（enteric

2、nervous system，ENS）中膽堿能腸神經(jīng)受損從而引起興奮性神經(jīng)遞質(zhì)乙酰膽堿（acetylcholine，Ach）減少是最重要的原因之一。盡管腸缺血再灌注在臨床中較為常見且可引起嚴重的并發(fā)癥和死亡率，但是仍缺乏有效的治療藥物。硫化氫（hydrogen sulfide，H2S）是一種內(nèi)源性氣體信號分子，在哺乳動物體內(nèi)發(fā)揮著許多重要的生理功能。近來，許多學者證實其可在多種臟器如心、肺、肝、腎、腸缺血再灌注模型中起到保護作用。但這些

3、實驗多數(shù)都是在缺血前預防性的給予硫化氫，尚未有實驗證實硫化氫能否在缺血之后起到保護腸神經(jīng)及腸運動功能的作用。本課題旨在研究在缺血之后再灌注之前給予硫化氫是否有保護腸收縮活性和腸神經(jīng)元的作用及相關(guān)機制。
　　 研究方法：24只雄性SD大鼠隨機分為4組（每組6只）：正常組（A），假手術(shù)組（B），腸缺血再灌注組（C），腸缺血再灌注加硫化氫干預組（D）。C組和D組大鼠通過夾閉腸系膜上動脈1h后松開血管夾再灌注4h 來建立腸缺血再灌注模型

4、；硫化氫的供體NaHS （10μmol/kg）于再灌注前20min 腹腔內(nèi)注射；B組大鼠僅行開腹后翻動腸道而未夾閉動脈。功能學實驗通過離體器官恒溫浴慒灌流技術(shù)記錄離體回腸肌條自發(fā)收縮和對氯化鉀（KCl；30mmol/L）、乙酰膽堿（Ach；10-5mol/L）、電場刺激（electricAlfieldstimulation，EFS；30V，10Hz，1.00ms，10s）的反應。形態(tài)學實驗通過免疫熒光檢測腸肌間神經(jīng)叢（myenteric

5、 plexus，MP）中Hu蛋白、膽堿乙酰轉(zhuǎn)移酶（cholineacetyltransferase，ChAT）受體陽性神經(jīng)元表達的變化。
　　 結(jié)果：1、與正常組相比，假手術(shù)組離體肌條自發(fā)收縮頻率、曲線下面積、對KCl、Ach和 EFS的反應、Hu蛋白和ChAT 受體陽性神經(jīng)元表達均無明顯改變。2、與假手術(shù)組相比，缺血再灌注組大鼠離體肌條自發(fā)收縮頻率、對KCl和Ach的反應無明顯改變；離體肌條自發(fā)收縮曲線下面積降低（p<0.05

6、），對EFS的反應明顯下降（p<0.05）；在免疫熒光中，Hu蛋白、ChAT 受體陽性神經(jīng)元表達均明顯降低（p<0.05）。3、與缺血再灌注組相比，硫化氫干預組大鼠離體肌條自發(fā)收縮頻率、對KCl和Ach的反應無明顯改變；離體肌條自發(fā)收縮曲線下面積升高（p<0.05），對EFS的反應升高（p<0.05）；在免疫熒光中，Hu蛋白、ChAT 受體陽性神經(jīng)元表達均明顯升高（p<0.05）。
　　 結(jié)論：1、腸缺血再灌注（I1h/R4h）