presepsin對(duì)燒傷膿毒癥早期診斷、判斷預(yù)后及指導(dǎo)抗生素使用的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：膿毒癥是大面積燒（燙）傷、嚴(yán)重創(chuàng)傷、休克及各種重度感染等臨床急危重癥患者的嚴(yán)重并發(fā)癥，是全身炎癥反應(yīng)綜合征的基礎(chǔ)上合并感染或高度可疑感染灶。膿毒癥是大面積燒傷患者主要死因之一，燒傷膿毒癥患者病情進(jìn)展迅速，病死率極高，治療費(fèi)用驚人。因此早期預(yù)測(cè)膿毒癥的發(fā)生發(fā)展，早期診斷并干預(yù)，是降低膿毒癥發(fā)病率及病死率的關(guān)鍵。膿毒癥的發(fā)生與發(fā)展伴隨著大量病理生理的變化，其中就包括各種炎癥生物標(biāo)記物的變化。目前臨床上有很多關(guān)于膿毒癥早期監(jiān)測(cè)以及預(yù)后的

2、指標(biāo)的研究，如廣泛應(yīng)用的血清學(xué)預(yù)警指標(biāo)血清降鈣素原(PCT)、C-反應(yīng)蛋白(CRP)、活化蛋白等，但大面積燒傷本身也會(huì)引起這些指標(biāo)的升高，使其在診斷預(yù)測(cè)評(píng)估燒傷患者合并膿毒癥的特異性及敏感性大大降低。近年來有研究顯示presepsin(sCD14-ST)是唯一與體內(nèi)感染相關(guān)的小分子可溶性蛋白，其水平不受各種創(chuàng)傷（包括燒傷）引起的SIRS的影響，這一特性可使其有望成為用來早期診斷、預(yù)測(cè)燒傷膿毒癥患者預(yù)后的新指標(biāo)。鑒于此，本文的研究目的分為

3、以下三部分:
　　1.血漿presepsin水平對(duì)大鼠燒傷膿毒癥的早期診斷及鑒別診斷價(jià)值;
　　2.presepsin水平判斷大鼠燒傷膿毒癥嚴(yán)重程度及預(yù)測(cè)膿毒癥預(yù)后的意義;
　　3.presepsin指導(dǎo)抗生素在燒傷膿毒癥使用的實(shí)驗(yàn)研究。
　　研究方法：第一章血漿presepsin水平對(duì)大鼠燒傷膿毒癥的早期診斷及鑒別診斷價(jià)值
　　實(shí)驗(yàn)1.膿毒癥大鼠血漿presepsin及PCT的動(dòng)態(tài)水平變化。
　　W

4、istar大鼠分成10組，每組6只共60只，按照4 ml/kg(濃度為1～5×1010cfu/ml)于腹腔內(nèi)注入對(duì)數(shù)生長期金葡菌標(biāo)準(zhǔn)株(ATCC25923)復(fù)制膿毒癥模型，并于第0h（注射金葡菌前）及注射金葡菌后第1，2，3，4，5，6，7，8，12h每一時(shí)間點(diǎn)取1組采取血標(biāo)本ELlSA法檢測(cè)血漿presepsin及PCT水平。比較復(fù)制膿毒癥前后presepsin及PCT開始升高的時(shí)間及到達(dá)峰值時(shí)間。
　　實(shí)驗(yàn)2.血漿presep

5、sin水平對(duì)大鼠燒傷膿毒癥的早期診斷及鑒別診斷價(jià)值。
　　Wistar大鼠分成4組:假燙傷組、10％TBSA燙傷組、30％TBSA燙傷組、30％TBSA燙傷+金葡菌組，每組42只共168只。10％TBSA燙傷組、30％TBSA燙傷組及30％TBSA燙傷+金葡菌組于24小時(shí)前按照不同面積予Ⅲ度燙傷，假燙傷組予用溫水(37℃)假燙傷按上述組別處理，30％TBSA燙傷+金葡菌組于第0h同法注射金葡菌標(biāo)準(zhǔn)株，各組均于第0h（注射金葡菌前）

6、，2h，12h，1d，3d，5d，7d每一時(shí)間點(diǎn)隨機(jī)取6只采取血標(biāo)本ELISA法檢測(cè)血漿presepsin及PCT水平。對(duì)資料進(jìn)行正態(tài)性檢驗(yàn)，非正態(tài)資料兩兩比較采用Mann-Whitney U檢驗(yàn);多組間比較用Kruskal--Wallis H檢驗(yàn);用SPASS軟件行ROC曲線分析，觀察presepsin并比較PCT診斷大鼠燒傷膿毒癥的敏感性，特異性，陽性預(yù)測(cè)值，陰性預(yù)測(cè)值及約登指數(shù);以靈敏度為縱坐標(biāo)，1-特異度為橫坐標(biāo)，繪制ROC曲線

7、，確定檢測(cè)的最佳閾值。
　　第二章 presepsin水平判斷大鼠燒傷膿毒癥嚴(yán)重程度及預(yù)測(cè)膿毒癥預(yù)后的意義
　　72只Wistar大鼠分成生存組和死亡組，每組36只，24小時(shí)前均行30％TBSAⅢ度燙傷后生存組于第0h腹腔按照4 ml/kg(濃度為1～5×1010cfu/ml)注射對(duì)數(shù)生長期金葡菌標(biāo)準(zhǔn)株復(fù)制膿毒癥，死亡組按照4ml/kg(濃度為1～5×1012cfu/ml)注射同一對(duì)數(shù)生長期金葡菌標(biāo)準(zhǔn)株復(fù)制燒傷膿毒癥死亡模型

8、，兩組均于第0h（注射金葡菌前）及復(fù)制膿毒癥后第2h，4h，6h，8h，12h每一時(shí)間點(diǎn)隨機(jī)取6只采取血標(biāo)本ELISA法檢測(cè)血漿presepsin及PCT水平。動(dòng)態(tài)觀察比較同一時(shí)間點(diǎn)生存組和死亡組presepsin及PCT水平變化，評(píng)估對(duì)預(yù)測(cè)不同預(yù)后的意義。對(duì)資料進(jìn)行正態(tài)性檢驗(yàn)，非正態(tài)資料兩兩比較采用Mann-Whitney U檢驗(yàn);用SPASS軟件行ROC曲線分析，觀察presepsin并比較PCT預(yù)測(cè)大鼠燒傷膿毒癥預(yù)后的敏感性，特異

9、性，陽性預(yù)測(cè)值，陰性預(yù)測(cè)值及約登指數(shù);以靈敏度為縱坐標(biāo)，1-特異度為橫坐標(biāo)，繪制ROC曲線，確定判斷預(yù)后的最佳閾值。
　　第三章 presepsin指導(dǎo)抗生素在燒傷膿毒癥使用的實(shí)驗(yàn)研究
　　Wistar大鼠分成治療組和對(duì)照組，每組48只共96只，各組于24小時(shí)前30％TBSAⅢ度燙傷后腹腔按照4 ml/kg(濃度為1～5×1010 cfu/ml)注射對(duì)數(shù)生長期金葡菌標(biāo)準(zhǔn)株復(fù)制膿毒癥，治療組在注射金葡菌6h后的第0h，24h，

10、48h按照1ml/kg股靜脈注射已配制好的頭孢曲松鈉溶液，對(duì)照組注射相同體積的生理鹽水，兩組均每日一次，連續(xù)三天。兩組于第0h（注射頭孢曲松或生理鹽水前）及注射頭孢曲松或生理鹽水后2h，6h，12h，18h，24h，48h，72h每一時(shí)間點(diǎn)隨機(jī)取6只采取外周血標(biāo)本ELISA法檢測(cè)血漿presepsin及PCT水平。動(dòng)態(tài)觀察比較同一時(shí)間點(diǎn)治療組和對(duì)照組presepsin及PCT水平變化，兩組間比較采用Mann-Whitney U檢驗(yàn)，評(píng)估

11、對(duì)預(yù)后的意義。
　　研究結(jié)果：第一章
　　1.大鼠腹腔注射金葡菌復(fù)制膿毒癥模型后2小時(shí)血液presepsin開始升高，8小時(shí)后達(dá)高峰，開始升高時(shí)間及達(dá)峰值時(shí)間均早于降鈣素原，達(dá)高峰后逐漸下降。
　　2.大面積燒傷(30％TBSA)會(huì)引起血液presepsin水平的輕度升高，小面積(10％ TBSA)燒傷與對(duì)照組無差異;presepsin早期診斷燒傷膿毒癥的敏感性及特異性高于降鈣素原，其診斷膿毒癥較少受到燒傷本身干擾的影

12、響。
　　第二章
　　1.注入金葡菌后，生存組presepsin在升至一定水平后逐漸下降;死亡組注入金葡菌后presepsin水平逐漸升高并保持在一較高水平;
　　2.2h后各時(shí)間點(diǎn)死亡組presepsin水平均高于生存組，其差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，對(duì)病情預(yù)測(cè)具有一定的價(jià)值;
　　3.presepsin預(yù)測(cè)燒傷膿毒癥預(yù)后的準(zhǔn)確性及敏感度比PCT更高，特異度略低。
　　第三章
　　1.治療組與對(duì)照組血漿pr

13、esepsin水平都經(jīng)歷—先升高后下降的過程。治療組經(jīng)治療后經(jīng)歷—較低的高峰后逐漸在24h內(nèi)恢復(fù)正常;對(duì)照組經(jīng)歷—較高的高峰后在3d內(nèi)呈緩慢降低的趨勢(shì)，在最后檢測(cè)時(shí)間點(diǎn)(3d)尚未恢復(fù)至正常水平。
　　2.治療組與對(duì)照組比較，除0h時(shí)間點(diǎn)p值大于0.05無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義外，余時(shí)間點(diǎn)p值均小于0.05，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。金黃色葡萄球菌誘導(dǎo)的presepsin水平的升高可經(jīng)治療后短期內(nèi)消除，治療效果明顯，因此presepsin可作為評(píng)價(jià)抗炎