新型造血相關(guān)轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子EDAG作用機(jī)制的初步研究.pdf

1、紅系發(fā)育相關(guān)基因(erythoiddevelopassociatedgene，EDAG)是本實(shí)驗(yàn)室自行分離克隆的一種特異表達(dá)于造血組織和細(xì)胞的新基因(中國(guó)專利申請(qǐng)?zhí)枺?1118268.8公開號(hào)：CN1388130A)。EDAG基因是從4月齡人胎肝組織與成年肝組織的差異表達(dá)基因EST庫中分離到的一種新基因片段，經(jīng)5’RACE獲得其全長(zhǎng)為2166bp的cDNA。該基因定位于染色體9q22，編碼484個(gè)氨基酸組成的蛋白質(zhì)，與小鼠Hemogen

2、及大鼠RP59基因同源。研究表明，EDAG高表達(dá)在胚胎組織和造血組織中，具有惡性轉(zhuǎn)化活性，與維持細(xì)胞的未分化狀態(tài)有關(guān)。高表達(dá)EDAG可使Ba/F3細(xì)胞存活能力增強(qiáng)，并可通過活化NF-κB上調(diào)c-myc、Bcl-xl、Bcl-2等增強(qiáng)細(xì)胞抗凋亡能力。轉(zhuǎn)基因小鼠的研究表明在小鼠造血細(xì)胞中過表達(dá)EDAG可導(dǎo)致造血干細(xì)胞增殖分化紊亂，突出表現(xiàn)在髓系造血增強(qiáng)，淋巴系造血抑制，并出現(xiàn)典型的髓系增生綜合征，表明EDAG是一種參與造血發(fā)育與分化調(diào)控的重

3、要基因。 目前EDAG調(diào)控細(xì)胞增殖、分化及凋亡的分子機(jī)制尚不明確。對(duì)EDAG蛋白的結(jié)構(gòu)進(jìn)行生物信息學(xué)分析發(fā)現(xiàn)，在其N端有一個(gè)典型的coiled-coiled結(jié)構(gòu)域，此結(jié)構(gòu)域多存在于單聚體蛋白中，且高度保守，通常介導(dǎo)蛋白與蛋白之間的相互作用。這提示我們EDAG很可能是通過與其他重要蛋白的相互作用發(fā)揮功能。 本研究制備了EDAG及THAP11多克隆抗體，檢測(cè)了EDAG及THAP11的蛋白水平表達(dá)情況，發(fā)現(xiàn)EDAG與THA

4、P11的表達(dá)有相似性，并通過共定位及Co-IP驗(yàn)證了二者的相互作用。初步探索THAP11對(duì)EDAG轉(zhuǎn)錄活性的影響，發(fā)現(xiàn)THAP11可增強(qiáng)EDAG的轉(zhuǎn)錄活性。通過熒光蛋白融合表達(dá)及Wesrtemblot分析可誘導(dǎo)表達(dá)EDAG穩(wěn)定細(xì)胞系中EDAG的分布兩種方法確定EDAG定位在細(xì)胞核中，為認(rèn)識(shí)EDAG的作用機(jī)理提供思路。利用IP-MS方法檢測(cè)到EDAG的相互作用蛋白HSP70，在K562細(xì)胞中驗(yàn)證二者的生理性相互作用，并初步探討了HSP70