N-型鈣離子通道抑制劑ω-芋螺毒素的表達(dá)、純化及活性研究.pdf

1、ω-芋螺毒素（Conopeptide，Conotoxin，CTX）是第一類(lèi)被確定的特異性阻斷電壓門(mén)控鈣離子通道（VGCC）的天然毒素。MⅦA作為一種ω-芋螺毒素，它能夠特異性地阻斷N-型電壓門(mén)控的鈣離子通道（NGCCs）。NGCCs在控制脊髓神經(jīng)的疼痛傳遞中起著極其重要的作用，而MⅦA通過(guò)阻斷該類(lèi)離子通道Cav2.2達(dá)到鎮(zhèn)痛效果，從而具有重要的臨床意義。但是目前 MⅦA在治療鎮(zhèn)痛時(shí)有較大的副作用，包括：眩暈、眼球震顫、嗜睡、步態(tài)異常和運(yùn)

2、動(dòng)失調(diào)等，嚴(yán)重影響了它的廣泛應(yīng)用。最近研究發(fā)現(xiàn)，MⅦA突變體ω-2具有與MⅦA同樣的鎮(zhèn)痛效果但副作用極小，因此大量合成ω-2毒素蛋白能極大推動(dòng)ω-2應(yīng)用到更多研究和醫(yī)藥領(lǐng)域。目前為止，絕大多數(shù)多肽毒素包括ω-2毒素，主要通過(guò)化學(xué)方法如固相多肽合成法獲得，但是該化學(xué)合成法過(guò)程復(fù)雜、耗時(shí)較長(zhǎng)且費(fèi)用昂貴。為此，為了高效經(jīng)濟(jì)地獲得大量ω-2毒素，本文擬在大腸桿菌表達(dá)系統(tǒng)中發(fā)展了一種新的ω-2毒素蛋白表達(dá)法，并通過(guò)此方法獲得了具有較高純度的ω-2

3、毒素蛋白。
　　ω-2毒素蛋白僅含25個(gè)氨基酸殘基，分子量較小，且ω-2富含二硫鍵，在大腸桿菌細(xì)胞質(zhì)相對(duì)偏還原的環(huán)境中純化表達(dá)非常困難。為了得到可溶性的ω-2融合蛋白，我們建立了MBP-ω-2和DsbC在OrigamiB（DE3）細(xì)胞質(zhì)中的共表達(dá)體系。在該表達(dá)體系中引入DsbC，其目的是促進(jìn)ω-2中二硫鍵的正確折疊，從而得到具有生物活性的ω-2毒素蛋白。通過(guò)該體系，我們成功獲得了可溶性的、空間結(jié)構(gòu)折疊良好且純度較高的ω-2毒素蛋白