基于自身紅細(xì)胞構(gòu)建的溶血系統(tǒng)檢測總補(bǔ)體活性及其與MICA基因多態(tài)性的關(guān)系.pdf

1、目的:
　　本文在CH50溶血法的基礎(chǔ)上，以人紅細(xì)胞替代綿羊紅細(xì)胞，將多管法轉(zhuǎn)化為單管法，創(chuàng)建一種操作簡單，穩(wěn)定可靠的檢測血漿補(bǔ)體總活性的新方法。同時(shí)本文應(yīng)用該法檢測ICU患者，冠心病患者，健康體檢者的血漿補(bǔ)體總活性，并在分子水平上研究了冠心病患者補(bǔ)體活性與MICA*008基因攜帶的關(guān)系。
　　方法:
　　1.首先以綿羊紅細(xì)胞替代人紅細(xì)胞，兔抗人紅細(xì)胞抗體替代兔抗羊紅細(xì)胞抗體（溶血素）進(jìn)行溶血試驗(yàn)，證明不同紅細(xì)胞濃度和

2、血漿濃度對紅細(xì)胞破壞后釋放血紅蛋白效能的影響。并通過CH50多管法溶血試驗(yàn)確定發(fā)生溶血反應(yīng)的各種試劑的最適濃度，創(chuàng)建單管溶血比色法。同時(shí)通過線性研究和重復(fù)試驗(yàn)驗(yàn)證了該法的準(zhǔn)確度和穩(wěn)定性。
　　2.使用CH50標(biāo)準(zhǔn)法檢測血漿和血清中的補(bǔ)體活性，并使用單管溶血比色法檢測以不同人紅細(xì)胞作為溶血指示系統(tǒng)的同一份血漿中的補(bǔ)體活性，進(jìn)一步驗(yàn)證單管溶血比色法的可行性。
　　3.使用CH50法和單管溶血比色法檢測同一份血漿的補(bǔ)體活性，驗(yàn)證兩

3、種方法的相關(guān)性。
　　4.使用單管溶血比色試驗(yàn)檢測ICU患者，冠心病患者和健康體檢者的補(bǔ)體總活性，證明該方法有一定的臨床應(yīng)用價(jià)值。同時(shí)采用PCR技術(shù)檢測冠心病患者和健康者的MICA*008基因攜帶情況，分析冠心病患者補(bǔ)體活性與MICA*008基因的關(guān)系。
　　結(jié)果:
　　1.本文應(yīng)用人紅細(xì)胞和兔抗人紅細(xì)胞抗體替代綿羊紅細(xì)胞和溶血素進(jìn)行溶血試驗(yàn)，結(jié)果發(fā)現(xiàn)不同濃度的紅細(xì)胞對溶血程度的影響低于不同濃度的血漿對溶血程度的影響，

4、同時(shí)，本文得出當(dāng)血漿濃度為20％時(shí)，紅細(xì)胞濃度的不同對紅細(xì)胞破壞后釋放血紅蛋白的效能影響最低。因此本文將20％紅細(xì)胞懸液所對應(yīng)第九管（20％血漿濃度）中各成分的含量，作為單管溶血比色法中各成分比例的參考。本文應(yīng)用單管溶血比色法檢測不同濃度血漿的補(bǔ)體活性，并連續(xù)5天測定同一份血漿的補(bǔ)體活性，結(jié)果證明不同濃度血漿的補(bǔ)體總活性呈線性分布，連續(xù)5天所測定的補(bǔ)體活性值的變異系數(shù)CV=11.3％，說明單管溶血比色試驗(yàn)具有一定的準(zhǔn)確性和穩(wěn)定性。

5、>　　2.通過CH50標(biāo)準(zhǔn)法檢測血漿和血清中的補(bǔ)體活性，本文得出血漿和血清中的補(bǔ)體活性完全相同，因此可以使用血漿替代血清標(biāo)本進(jìn)行補(bǔ)體活性測定，補(bǔ)體檢測技術(shù)得到了優(yōu)化。同時(shí)，通過不同人紅細(xì)胞作為溶血指示系統(tǒng)檢測同一份血漿中的補(bǔ)體活性，本文得出血漿中的補(bǔ)體活性大致相同(P＞0.05)，說明不同紅細(xì)胞不會影響血漿中的補(bǔ)體含量，單管溶血法具有可行性。
　　3.該方法中測定的溶血OD值與CH50溶血法所測的補(bǔ)體活性值兩者呈線性相關(guān)，說明單管

6、溶血比色法與CH50法具有顯著的相關(guān)關(guān)系，單管溶血比色法可以替代CH50溶血法檢測補(bǔ)體總活性。
　　4.ICU患者和冠心病患者的補(bǔ)體活性要顯著低于健康體檢者的補(bǔ)體活性，單管溶血比色法有一定的臨床應(yīng)用價(jià)值。冠心病患者和健康體檢者的MICA*008基因分布大致相同，同時(shí)冠心病患者的補(bǔ)體水平與MICA*008的攜帶沒有顯著關(guān)聯(lián)。
　　結(jié)論:
　　1.單管溶血法檢測補(bǔ)體活性具有良好的準(zhǔn)確性，穩(wěn)定性和可行性，并且與CH50法具有