黑脊倒刺鲃幾種生殖系標(biāo)記基因的克隆、鑒定及其在生殖細(xì)胞發(fā)育中的表達(dá).pdf

1、生殖細(xì)胞標(biāo)記基因是一類指示、追蹤生殖細(xì)胞相關(guān)生理活動(dòng)的基因,被廣泛用于性腺發(fā)生、配子發(fā)生和原生殖細(xì)胞的起源、遷移、分化等方面的研究。而且對(duì)于分離生殖細(xì)胞進(jìn)行體外培養(yǎng)及移植,為瀕臨滅絕的物種借助近緣物種進(jìn)行生殖繁衍保護(hù)也提供了有用的工具。
　　 本實(shí)驗(yàn)通過(guò)同源克隆的策略,成功克隆出黑脊倒刺鲃中關(guān)于生殖細(xì)胞早期發(fā)育階段的標(biāo)記基因Sc-vasa,Sc-nanos以及與生殖細(xì)胞減數(shù)分裂Ⅰ相關(guān)的基因Sc-scp3:Sc-vasa基因開(kāi)放閱

2、讀框的全長(zhǎng)1962 bp,其編碼654個(gè)氨基酸。經(jīng)比對(duì)發(fā)現(xiàn),黑脊倒刺鲃Vasa蛋白與銀鯽、金魚(yú)、草魚(yú)、虹鱒魚(yú)、金槍魚(yú)、斑馬魚(yú)、羅非魚(yú)和黃鱔的Vasa蛋白相似度分別為90％、89％、86％、79％、79％、77％、77％、74％；Sc-nanos基因開(kāi)放閱讀框的全長(zhǎng)456 bp,其編碼125個(gè)氨基酸。經(jīng)比對(duì)發(fā)現(xiàn),黑脊倒刺鲃Nanos蛋白與鯉魚(yú)、斑馬魚(yú)、紫色球海膽、家蠶和大熊貓的Nanos蛋白的相似度分別為81％、63％、52％、50％、4

3、4％；Sc-scp3基因部分開(kāi)放閱讀框的全長(zhǎng)序列477 bp,其編碼159個(gè)氨基酸。經(jīng)比對(duì)發(fā)現(xiàn),黑脊倒刺鲃Scp3蛋白與斑馬魚(yú)、虹鱒魚(yú)、非洲爪蟾、牛、人和小鼠的Scp3蛋白相似度分別為93％、84％、72％、69％、66％、65％。
　　 半定量RT-PCR分析顯示,Sc-vasa、Sc-nanos和Sc-scp3三種基因僅在黑脊倒刺鲃成魚(yú)的性腺組織中特異的表達(dá)。RNA原位雜交結(jié)果表明:在精子發(fā)生中,Sc-vasamRNA、Sc