黑脊倒刺鲃幾種生殖系標(biāo)記基因的克隆、鑒定及其在生殖細胞發(fā)育中的表達.pdf

1、生殖細胞標(biāo)記基因是一類指示、追蹤生殖細胞相關(guān)生理活動的基因,被廣泛用于性腺發(fā)生、配子發(fā)生和原生殖細胞的起源、遷移、分化等方面的研究。而且對于分離生殖細胞進行體外培養(yǎng)及移植,為瀕臨滅絕的物種借助近緣物種進行生殖繁衍保護也提供了有用的工具。
　　 本實驗通過同源克隆的策略,成功克隆出黑脊倒刺鲃中關(guān)于生殖細胞早期發(fā)育階段的標(biāo)記基因Sc-vasa,Sc-nanos以及與生殖細胞減數(shù)分裂Ⅰ相關(guān)的基因Sc-scp3:Sc-vasa基因開放閱

2、讀框的全長1962 bp,其編碼654個氨基酸。經(jīng)比對發(fā)現(xiàn),黑脊倒刺鲃Vasa蛋白與銀鯽、金魚、草魚、虹鱒魚、金槍魚、斑馬魚、羅非魚和黃鱔的Vasa蛋白相似度分別為90％、89％、86％、79％、79％、77％、77％、74％；Sc-nanos基因開放閱讀框的全長456 bp,其編碼125個氨基酸。經(jīng)比對發(fā)現(xiàn),黑脊倒刺鲃Nanos蛋白與鯉魚、斑馬魚、紫色球海膽、家蠶和大熊貓的Nanos蛋白的相似度分別為81％、63％、52％、50％、4

3、4％；Sc-scp3基因部分開放閱讀框的全長序列477 bp,其編碼159個氨基酸。經(jīng)比對發(fā)現(xiàn),黑脊倒刺鲃Scp3蛋白與斑馬魚、虹鱒魚、非洲爪蟾、牛、人和小鼠的Scp3蛋白相似度分別為93％、84％、72％、69％、66％、65％。
　　 半定量RT-PCR分析顯示,Sc-vasa、Sc-nanos和Sc-scp3三種基因僅在黑脊倒刺鲃成魚的性腺組織中特異的表達。RNA原位雜交結(jié)果表明:在精子發(fā)生中,Sc-vasamRNA、Sc