ERK1-2對(duì)高糖環(huán)境下足細(xì)胞凋亡的作用及來氟米特對(duì)其的影響.pdf

1、目的：觀察ERK1/2對(duì)高糖環(huán)境下足細(xì)胞凋亡的作用及來氟米特對(duì)其的影響，以進(jìn)一步探討來氟米特對(duì)DN 治療作用及其可能機(jī)制。
　　 方法：培養(yǎng)的人足細(xì)胞分為正常糖組、高滲對(duì)照組、高糖組，高糖組按不同刺激時(shí)間又分為0.5h、1h、6h、12h、24h 五組，應(yīng)用Western 印跡分析法檢測(cè)各組足細(xì)胞ERK1/2信號(hào)途徑中ERK1/2蛋白活化的變化。足細(xì)胞凋亡檢測(cè)：將足細(xì)胞分為高糖對(duì)照組、高糖+抑制劑組、高糖+抑制劑+來氟米特（A7

2、71726）組、高糖+A771726組，將以上各組足細(xì)胞培養(yǎng)24小時(shí)后，分別進(jìn)行ERK1/2信號(hào)途徑的檢測(cè)同前及流式細(xì)胞儀檢測(cè)足細(xì)胞的凋亡率。
　　 結(jié)果:
　　 （1）高糖組30分鐘可以活化ERK1/2蛋白，6h 開始達(dá)高峰，持續(xù)活化到24小時(shí)開始降至基礎(chǔ)水平。正常糖及高滲對(duì)照組未能活化ERK1/2。
　　 （2）與高糖組相比，ERK1/2蛋白抑制劑（PD98059）抑制了ERK1/2的磷酸化，使磷酸化的ERK

3、1/2（P-ERK1/2）蛋白表達(dá)明顯減少（P=0.003），從而影響了下游多種核轉(zhuǎn)錄因子的活化,影響目的基因的表達(dá)而增加了足細(xì)胞的凋亡（P=0.001）。
　　 （3）A771726 可以增加P-ERK1/2的表達(dá)量（P=0.002），從而減少足細(xì)胞的凋亡（P=0.021）。而PD98059 可以影響A771726的作用，使其對(duì)足細(xì)胞的保護(hù)作用減弱，其凋亡率比高糖組明顯增加（P=0.006）。
　　 結(jié)論：ERK1/2