猿猴空泡病毒40（SV40）T基因的克隆與表達及其多抗在轉基因小鼠中的應用.pdf

1、猿猴空泡病毒40(SV40)是60年代初發(fā)現(xiàn)分離的猴腎細胞病毒,它是一種DNA病毒,其在體外可使人及動物多種組織類型正常細胞發(fā)生惡性轉化,在轉基因小鼠體內可誘發(fā)多種腫瘤形成,并且人類許多腫瘤的發(fā)生也與之有關.近年來,人們對SV40與人類腫瘤的關系進行了大量的研究.該實驗室建立的SV40轉基因小鼠腫瘤模型多發(fā)胰腺癌,為進一步研究SV40與腫瘤發(fā)生的關系,為人們研究癌癥的病因、發(fā)病機理以及治療提供有力的工具打下堅實的基礎.該文通過抽提COS

2、-1細胞總RNA作為模板,根據(jù)GenBank中SV40 T基因序列設計一對引物,用RT-PCR技術擴增出921bp的SV40 T基因片段,克隆到pGEM-T easy載體中,經(jīng)測序后,再亞克隆到pGEX-6p-1谷光甘肽-S-轉移酶(GST)基因的下游,獲得的重組質粒轉化大腸桿菌BL21,用IPTG誘導SV40 T基因片段的表達,經(jīng)SDS-PAGE電泳及western-blotting分析,GST-S融合蛋白的分子質量為53kDa.用該

3、表達產物免疫新西蘭大白兔,所制備的抗血清經(jīng)間接免疫熒光實驗(IFA)顯示可與COS-1細胞發(fā)生特異性反應,表明采用大腸桿菌原核表達系統(tǒng)所表達的融合蛋白具有SV40 T抗原的免疫原性.用所制備的兔多抗血清(多克隆抗體IgG)為一抗,對該實驗室的不同發(fā)育時期的SV40轉基因小鼠的各重要器官和腫瘤組織進行SABC法免疫組織化學檢測,發(fā)現(xiàn)只有發(fā)瘤小鼠的腫瘤組織細胞有特異性的棕黃色顆粒,呈陽性反應,表明由于SV40T抗原的表達使得正常的胰腺細胞發(fā)