Ac-SDKP活化cAMP-Epac信號轉(zhuǎn)導通路對AngII介導的矽肺肌成纖維細胞分化的調(diào)節(jié).pdf

1、目的：研究 N-乙?；?絲氨酰-天門冬氨酰-賴氨酰-脯氨酸（Ac-SDKP）經(jīng)由 Epac信號對矽肺大鼠肌成纖維細胞分化的調(diào)節(jié)作用，以及對血管緊張素（Ang）II誘導的人胚肺MRC-5成纖維細胞向肌成纖維細胞分化的抑制機制。
　　方法：構建矽肺大鼠模型，并予以Ac-SDKP抗纖維化治療或預防治療，HE和Masson染色法觀察病理形態(tài)，免疫組織化學染色法檢測α-平滑肌肌動蛋白（α-SMA）表達，western blot法檢測 I型膠

2、原、血清反應因子（SRF）、β2腎上腺素受體（ADRB2）和cAMP直接激活的交換蛋白（Epac）1蛋白的表達。采用 Ang II誘導MRC-5成纖維細胞并予以Ac-SDKP或8-Me-cAMP預處理，免疫細胞化學染色法觀察α-SMA、SRF的表達與定位，western blot法檢測細胞外基質(zhì) I型膠原、α-SMA、SRF及其轉(zhuǎn)錄輔因子（MRTF）-A、Epac1和Epac2的表達。用SPSS13.0軟件進行統(tǒng)計學分析，P<0.05為

3、差異具有統(tǒng)計學意義。
　　結果：在矽肺模型組中，出現(xiàn)明顯矽結節(jié)，結節(jié)內(nèi)可見α-SMA標記的肌成纖維細胞陽性表達，western blot法檢測矽肺組織中 I型膠原、α-SMA、SRF表達上調(diào)，而 ADRB2和Epac1蛋白表達下調(diào)，給予 Ac-SDKP抗纖維化治療或預防治療能夠抑制該變化。Ang II能夠顯著誘導MRC-5細胞I型膠原和α-SMA蛋白的表達，并具有一定的劑量和時間依賴效應。給予 Ang II誘導，免疫細胞化學染色可

4、見胞漿內(nèi)出現(xiàn)明顯的α-SMA陽性顯色，胞核內(nèi) SRF陽性顯色。同時 western blot檢測SRF、MRTF-A、α-SMA和I型膠原蛋白表達的上調(diào)，分別是對照組的3.4倍、3.5倍、3.3倍和6.8倍，差異均有統(tǒng)計學意義（P<0.05）；而予以Epac蛋白特異性激活劑（8-Me-cAMP）或 Ac-SDKP預處理，能夠抑制胞漿內(nèi)α-SMA和胞核內(nèi) SRF的陽性表達，通過上調(diào)Epac1而非Epac2蛋白的表達，抑制Ang II誘導的