基于THCA354凝膠經(jīng)皮給藥系統(tǒng)的構(gòu)建及藥代動力學(xué)研究.pdf

1、目的:皮炎濕疹類皮膚病是臨床常見的一類遲發(fā)型變態(tài)反應(yīng)性疾病，近年來發(fā)病率呈逐年上升趨勢，臨床治療該類病癥的常用藥物長期使用均存在毒副作用和較多不良反應(yīng)，開發(fā)一種治療效果顯著、毒副作用小的外用經(jīng)皮制劑已經(jīng)成為臨床治療的迫切需求。(E)-苯乙基-3-（3，5-二羥基-4-異丙基苯基）丙烯酸酯(THCA354)是本課題組在前期藥物篩選研究中，通過借鑒多酚苯丙烯酸和多酚二苯乙烯的結(jié)構(gòu)特性及生理活性等特點(diǎn)，在天然苯丙烯酸（3-苯基-2-丙烯酸）的

2、母體結(jié)構(gòu)上，經(jīng)構(gòu)效關(guān)系研究篩選合成的一新型多酚丙烯酸衍生物。前期的藥效學(xué)研究結(jié)果表明，該化合物具有顯著的抗炎、抗過敏藥理學(xué)活性。本論文通過考察THCA354的主要理化性質(zhì)，以處方前研究結(jié)果預(yù)測該化合物的經(jīng)皮滲透性能，將其開發(fā)成一外用凝膠制劑;通過正交試驗(yàn)和藥效學(xué)試驗(yàn)篩選優(yōu)化出凝膠劑處方及工藝，并進(jìn)一步對制劑開展藥效學(xué)研究;通過采用微透析技術(shù)聯(lián)用HPLC-MS分析方法對THCA354凝膠劑開展藥代動力學(xué)研究，探究該制劑在動物體上的體內(nèi)外濃

3、度-效應(yīng)關(guān)系，為將其開發(fā)成為臨床上治療皮炎濕疹類皮膚病的外用制劑奠定基礎(chǔ)。
　　方法:1.依據(jù)《中國藥典》（2015版）中相關(guān)通則，考察THCA354的主要理化參數(shù):如外觀性狀、熔點(diǎn)、溶解度、溶解度與pH值的關(guān)系和油/水分配系數(shù)，通過處方前研究結(jié)果對THCA354的經(jīng)皮滲透性能進(jìn)行初步預(yù)測。
　　2.結(jié)合處方前研究結(jié)果，以L9(34)正交設(shè)計(jì)試驗(yàn)為基礎(chǔ)。通過采用單次TPA、花生四烯酸誘導(dǎo)的小鼠亞急性、急性炎癥模型和DNFB（

4、2，4—二硝基氟苯）誘導(dǎo)的小鼠遲發(fā)型超敏反應(yīng)模型評價(jià)各組凝膠劑的抗炎、抗過敏作用，篩選出最佳制劑工藝處方，并在此基礎(chǔ)上研制自乳化基質(zhì)THCA354乳膏劑。
　　3.采用單次TPA、花生四烯酸和多次TPA誘導(dǎo)的小鼠亞急性、急性和慢性炎癥模型，考察THCA354凝膠劑和乳膏劑的抗炎效果和量效關(guān)系;采用DNFB誘導(dǎo)的小鼠遲發(fā)型超敏反應(yīng)模型，考察最優(yōu)處方工藝THCA354凝膠劑和乳膏劑的抗過敏作用效果和量效關(guān)系;采用C48/80誘導(dǎo)的小鼠

5、瘙癢模型，考察最優(yōu)處方工藝THCA354凝膠劑和乳膏劑的抗瘙癢作用和量效關(guān)系。
　　4.通過考察微透析探針體外回收率影響因素和探針的體內(nèi)外回收率，建立了基于大鼠皮下藥物采集的微透析采樣方法;以此采樣技術(shù)，通過系統(tǒng)的方法學(xué)驗(yàn)證，建立了THCA354在大鼠真皮層濃度的HPLC-MS分析方法，針對大鼠經(jīng)皮給藥后皮膚下THCA354的濃度開展藥代動力學(xué)研究;并結(jié)合體外藥效學(xué)研究結(jié)果，闡明THCA354在作用靶部位的濃度-效應(yīng)-時(shí)間關(guān)系。<

6、br>　　結(jié)果:對THCA354的性狀和理化性質(zhì)研究表明THCA354是一種微黃色疏松狀、無臭無味的粉末狀結(jié)晶，熔點(diǎn)為164.80℃;溶解度實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明THCA354易溶于甲醇、乙醇、丙酮、乙酸乙酯，溶解于丙二醇，微溶于0.1 mol/L NaOH，在純水和0.1 mol/L HCl中幾乎不溶，并且溶解度在pH值為5.0～9.0范圍內(nèi)呈pH值依賴，油/水分配系數(shù)lgP=1.857，表明THCA354適合于制成外用經(jīng)皮制劑。
　　通

7、過L9(34)正交試驗(yàn)和單次TPA、花生四烯酸誘導(dǎo)的小鼠耳腫脹炎癥模型，DNFB誘導(dǎo)的小鼠遲發(fā)型超敏反應(yīng)模型，篩選出最優(yōu)凝膠劑處方工藝為:主藥和主要輔料的配比為THCA354為5.00％，卡波姆為2.00％，丙二醇為5.00％，甘油為5.00％。并在此基礎(chǔ)上制各自乳化基質(zhì)THCA354乳膏劑(5.00％)。
　　藥效學(xué)研究實(shí)驗(yàn)表明，5.00％THCA354凝膠劑和乳膏劑對單次TPA、花生四烯酸和多次TPA誘導(dǎo)的亞急性、急性和慢性炎

8、癥均有顯著抑制作用，且對單次TPA和AA誘導(dǎo)的炎癥在(10～40mg)范圍內(nèi)呈量效依賴關(guān)系;對DNFB誘導(dǎo)的遲發(fā)型超敏反應(yīng)有顯著的抑制作用，且在(6～48mg)范圍內(nèi)呈量效依賴關(guān)系;低、中劑量(10mg和20 mg)的凝膠劑和乳膏劑可顯著抑制C48/80誘導(dǎo)的瘙癢行為。
　　探針微透析回收率實(shí)驗(yàn)表明，THCA354的探針體外回收率隨著灌注液灌注速度的增大而減小，與周圍溶液中藥物的濃度和灌注液中藥物的濃度大小無關(guān)。增量法和減量法測定

9、的回收率和傳遞率大小一致，探針對THCA354的體外回收率為22.51±0.69％，傳遞率為21.12±2.88％，反向透析法測定體內(nèi)皮下藥物傳遞率為12.04±1.21％，且在6h內(nèi)傳遞率基本保持穩(wěn)定，推算出體內(nèi)回收率為12.83％。
　　采用HPLC-MS方法分析技術(shù)建立用于大鼠真皮層微透析液中THCA354的含量測定方法，該方法線性良好，回收率和精密度等均符合體內(nèi)藥物測定要求，可用于微透析樣品的準(zhǔn)確測定。
　　通過上述

10、建立的HPLC-MS方法測定大鼠THCA354凝膠經(jīng)皮給藥后不同時(shí)間段皮膚微透析液中的藥物濃度，280 min后能在大鼠真皮層中檢測到藥物，結(jié)合得到的平均藥物濃度-時(shí)間曲線，研究表明，大鼠經(jīng)皮給藥后藥物能夠轉(zhuǎn)運(yùn)達(dá)到真皮層，且在真皮層中藥物濃度達(dá)峰時(shí)間為(440～460) min，達(dá)峰濃度為（72.00±69.47）ng/mL，在460 min以后藥物濃度逐漸下降，直至600 min未有藥物被檢測到，藥物在真皮內(nèi)停留約320 min。

11、r>　　結(jié)論:THCA354處方前研究表明該化合物適合制備成外用經(jīng)皮制劑，通過正交設(shè)計(jì)試驗(yàn)和藥效學(xué)研究篩選并制得的THCA354凝膠劑和乳膏劑具有顯著的抗炎、抗過敏和抗瘙癢作用。通過進(jìn)一步的皮膚藥代動力學(xué)研究表明:THCA354凝膠劑經(jīng)皮給藥后，藥物能夠轉(zhuǎn)運(yùn)達(dá)到真皮層，藥物在皮膚真皮層中440～460 min達(dá)最大濃度為（72.00±69.47）ng/mL，并在真皮層中持續(xù)320 min可被檢測到，表明藥物在真皮內(nèi)停留較長時(shí)間并持續(xù)發(fā)揮