基于噻唑烷二酮結(jié)構(gòu)的新型PPARγ部分激動(dòng)劑的抗糖尿病作用及機(jī)制研究.pdf

1、背景:
　　糖尿病在我國及世界的發(fā)病形勢十分嚴(yán)峻，已成為威脅人類健康的第三大疾病。糖尿病患者中90％屬于2型糖尿病。臨床治療2型糖尿病的藥物種類很多，其中，噻唑烷二酮類(Thiazolidinediones,TZDs)是一類人工合成的過氧化物酶增殖物激活受體γ(Peroxisomeproliferator-activated receptorγ，PPARγ)激動(dòng)劑，它能改善外周胰島素敏感性并長期有效控制血糖。然而，經(jīng)典TZDs藥物

2、引起體重增加、體液潴留、骨折及心衰等副反應(yīng)，嚴(yán)重地限制了其臨床使用。研究表明TZDs發(fā)揮胰島素增敏作用并不需要完全激動(dòng)PPARγ，相反，對PPARγ激動(dòng)能力較弱的PPARγ部分激動(dòng)劑在保留胰島素增敏，發(fā)揮治療作用的同時(shí)，具有更好的安全性，顯示出良好的應(yīng)用前景。
　　課題組成員在前期實(shí)驗(yàn)中合成了一系列TZDs衍生物，成功建立PPARγ激動(dòng)劑篩選模型，篩選出具有PPARγ部分激動(dòng)效應(yīng)的化合物:CMHX003和CMHX008。前期實(shí)驗(yàn)結(jié)

3、果發(fā)現(xiàn)CMHX003和CMHX008可有效激動(dòng)PPARγ，但激動(dòng)能力弱于羅格列酮;CMHX008促進(jìn)3T3-L1前脂肪細(xì)胞分化，增加脂肪細(xì)胞脂質(zhì)沉積，并且這一作用可被PPARγ特異性阻斷劑GW9662所抑制;此外，CMHX008還可增強(qiáng)脂聯(lián)素和葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)體4(Glucose transporter4，Glut4) mRNA表達(dá)，增加脂聯(lián)素分泌，同時(shí)對aP2增強(qiáng)表達(dá)的作用明顯弱于羅格列酮。
　　因此，本研究旨在1）在細(xì)胞水平驗(yàn)證CM

4、HX003對PPARγ的部分激動(dòng)效應(yīng);2）觀察CMHX008對肥胖小鼠是否具有胰島素增敏作用，并探討其機(jī)制。
　　方法:采用經(jīng)典雞尾酒誘導(dǎo)法誘導(dǎo)3T3-L1前脂肪細(xì)胞分化，誘導(dǎo)過程中加入不同濃度的CMHX003和羅格列酮處理，誘導(dǎo)分化第7天，用油紅O染色觀察細(xì)胞分化情況，Real-time PCR檢測細(xì)胞脂聯(lián)素和aP2基因mRNA水平;ELISA法測定細(xì)胞培養(yǎng)上清液中脂聯(lián)素的分泌水平。
　　C57BL/6雄性小鼠用高脂飼料和

5、正常飼料喂養(yǎng)16周，將高脂喂養(yǎng)的小鼠隨機(jī)分為4組:溶劑對照組、羅格列酮(3mg/kg/day)組和CMHX008(3mg/kg/day和10mg/kg/day)組，每組7～8只，采用灌胃的方法給予溶劑或藥物5周。記錄小鼠體重變化，給藥4周后施行葡萄糖耐量試驗(yàn)。實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)，生化分析檢測血清脂質(zhì)水平，ELISA檢測血清脂聯(lián)素濃度;液態(tài)芯片檢測血清胰島素及相關(guān)炎性因子濃度;H&E和油紅O染色法觀察肝臟脂質(zhì)沉積和脂肪細(xì)胞形態(tài);Real-time

6、 PCR分析肝臟和脂肪組織炎性基因mRNA水平。
　　結(jié)果:CMHX003能促進(jìn)3T3-L1前脂肪細(xì)胞分化，但其作用弱于羅格列酮;CMHX003增強(qiáng)脂聯(lián)素基因表達(dá)及增加脂聯(lián)素分泌水平的作用和羅格列酮相似，且較少增強(qiáng)aP2基因的表達(dá)。
　　CMHX008和羅格列酮均能顯著改善高脂飲食誘導(dǎo)肥胖小鼠的葡萄糖耐量受損。與高脂溶劑對照組相比，CMHX008能顯著降低脂肪組織重量、脂肪細(xì)胞的面積，降低血清低密度脂蛋白(LDL)、谷草轉(zhuǎn)氨

7、酶(AST)濃度，降低血清腫瘤壞死因子(TNF-α)和白介素6（IL-6）濃度。和羅格列酮組相比，CMHX008無明顯增加肝臟重量，并顯著減少肝臟脂質(zhì)沉積。CMHX008降低脂肪組織中的M1型巨噬細(xì)胞標(biāo)志基因CD11c的水平，增加M2型標(biāo)志基因CD206水平，降低TNF-α、IL-6的mRNA水平，降低肝臟中TNF-α的mRNA表達(dá)。
　　結(jié)論:新型PPARγ部分激動(dòng)劑CMHX008的在體胰島素增敏作用與羅格列酮相當(dāng);其效應(yīng)與改善