ESBLs與AmpC酶在耐多藥大腸埃希菌中分布的研究.pdf

1、目的：了解本地區(qū)大腸埃希菌（Escherichia coli，E．coli）AmpC酶基因型分布、CTX-M-14、CTX-M-15基因的攜帶情況，分析產(chǎn)ESBLs、AmpC酶大腸埃希菌耐藥現(xiàn)狀，為臨床合理選擇抗菌藥物提供指導(dǎo)依據(jù)。
　　方法：1.抗菌藥物敏感試驗：紙片擴散法（K-B法）：采用 CLSI推薦的紙片擴散法測定西南醫(yī)科大學(xué)附屬醫(yī)院2014年7月-2014年11月臨床分離的155株大腸埃希菌對14種抗菌藥物（阿莫西林克拉

2、維酸AMC、氨芐西林AMP、頭孢他啶CAZ、頭孢噻肟CTX、頭孢哌酮舒巴坦CFS、頭孢吡肟FEP、氨曲南ATM、頭孢西丁FOX、亞胺培南IMP、左氧氟沙星LEV、環(huán)丙沙星CIP、慶大霉素GEN、阿米卡星AMK、復(fù)方新諾明SXT）的耐藥性，結(jié)果參照2014版CLSI標(biāo)準(zhǔn)判讀，質(zhì)控菌株為ATCC25922。2.ESBLs篩選和確認(rèn)試驗：選擇CTX、CAZ以及ATM藥敏紙片初步篩選試驗，若 CAZ的抑菌環(huán)直徑≤22 mm,ATM或CTX≤27

3、 mm,為可疑產(chǎn)ESBLs菌株，進一步用雙紙片法進行確認(rèn)實驗。3.AmpC酶初篩及三維試驗：根據(jù)K-B法進行頭孢西丁耐藥性檢測，若抑菌環(huán)≤18mm則為可疑產(chǎn)AmpC酶。根據(jù)三維試驗方法（Coudron等推薦），由β-內(nèi)酰胺酶粗提物能否水解頭孢西?。‵OX）來判定其產(chǎn)AmpC酶與否。4.PCR技術(shù)：檢測三維實驗陽性菌株的AmpC酶基因及確認(rèn)試驗陽性ESBLs菌株的CTX-M-14，CTX-M-15酶基因型。參考文獻設(shè)計8對特異性引物，采用

4、普通質(zhì)粒提取試劑盒提取待檢菌株的質(zhì)粒DNA作為PCR反應(yīng)模板。各標(biāo)本均使用分別設(shè)計好的引物擴增，擴增陽性片段長度分別為520bp(MOX)、462bp(CIT)、405bp(DHA)、346bp(ACC)、302bp(MIR)、190bp(FOX)、415bp(CTX-M-15)、205bp(CTX-M-14）。使用擴增產(chǎn)物進行2％瓊脂糖凝膠電泳，紫外線分析裝置觀察結(jié)果。對部分?jǐn)U增陽性的PCR產(chǎn)物進行測序（送至上海生工生物技術(shù)公司），將

5、測序結(jié)果輸入GenBank進行同源性分析。
　　結(jié)果：1.抗菌藥物敏感試驗結(jié)果：155株大腸埃希菌的耐藥率分別為：AMP89.68%、AMC88.39%、SXT75.48%、CTX58.06%、GEN49.03%、CIP47.10%、LEV33.55%、CAZ28.39%、ATM19.35%、FEP10.97%、FOX8.39%、AMK2.58%、CFS1.29%、IMP0%。其中多耐菌株57.42%、雙耐22.58%、單耐13.

6、33%、全敏7.10%。2.產(chǎn)ESBLs酶菌株檢測及耐藥模式：本次實驗菌總體產(chǎn)ESBLs率為62.58%，在不同耐藥模式中，多耐菌株產(chǎn)ESBLs率（78.61%）高于單耐菌株（25%）。產(chǎn)ESBLs菌株中有70株為多耐,22株為雙耐,15株為單耐。3.產(chǎn)AmpC酶菌株檢測及耐藥模式:產(chǎn)AmpC酶率9.68%，其中有12株為多耐,2株為雙耐,1株為單耐。4.醫(yī)院獲得性感染耐藥情況:醫(yī)院獲得性大腸埃希菌感染中產(chǎn)ESBLs率為67.86%，產(chǎn)

7、AmpC酶率為14.29%，多耐比例達(dá)75%。5.產(chǎn)ESBLs與非ESBLs菌耐藥率比較:產(chǎn)ESBLs菌株耐藥率由高到低分別為：AMC98.97%、AMP97.94%、CTX87.63%、SXT87.63%、CIP65.98%、GEN56.70%、LEV47.42%、CAZ43.30%、ATM31.96%、FEP15.46%、FOX10.31%、AMK4.12%、CFS1.03%、IMP0%。與ESBLs陰性組對比，前者對AMP、AMC

8、、CAZ、CTX、FEP、ATM、LEV、CIP、GEN、SXT耐藥率高于后者。6.產(chǎn) AmpC酶與非產(chǎn) AmpC酶耐藥率比較：產(chǎn) AmpC酶大腸埃希菌耐藥率分別為：AMP93.33%、AMC93.33%、LEV93.33%、SXT93.33%、CIP86.67%、CTX86.67%、CAZ73.33%、ATM66.67%、GEN60%、FEP33.33%，AMK、CFS、IMP0%。與AmpC酶陰性組對比，前者對 CAZ、CTX、FE

9、P、ATM、LEV、CIP耐藥率高于后者。7.PCR法擴增耐藥基因情況：產(chǎn)ESBLs菌株CTX-M-14、CTX-M-15檢出率均為47.42%；產(chǎn)AmpC酶菌株中檢出pAmpC酶基因共5株，其中1株為DHA型，3株為CIT型，1株為ACT型；共同產(chǎn)ESBLs及質(zhì)粒型AmpC酶菌株共4株。8.不同耐藥模式ESBLs基因情況：不同耐藥模式產(chǎn)ESBLs菌株攜帶CTX-M-14、CTX-M-15的差異不具有統(tǒng)計學(xué)意義。9.本地不同時期耐藥率比

10、較：本次實驗中大腸埃希菌對FEP、LEV、CIP、GEN的耐藥率與2007年7月至2008年8月結(jié)果有所下降。10.產(chǎn)SSBLs菌株檢測情況：本實驗共檢出產(chǎn)SSBL大腸埃希菌共4株，全為多重耐藥菌，僅對AMK、IMP、CFS有較好的敏感性。
　　結(jié)論：1．本地區(qū)臨床分離的大腸埃希菌耐藥情況嚴(yán)重，對除碳青霉烯類外的β-內(nèi)酰胺類抗生素、喹諾酮類、氨基糖苷類、葉酸代謝抑制劑均呈不同程度的耐藥，且多重耐藥菌比例高；2．本地區(qū)大腸埃希菌產(chǎn)E