骨髓增生異常綜合征患者線粒體Mitoferrin-1--2、ABCD10的表達(dá)與其鐵超載的關(guān)系.pdf

1、研究目的:
　　 通過對骨髓增生異常綜合征(myelodysplasticsyndromes，MDS)患者M(jìn)itoferrin-1、Mitoferrin-2和ABCB10在基因水平和蛋白水平的表達(dá)研究，揭示MDS患者線粒體鐵超載的原因，探討線粒體鐵代謝異常在MDS發(fā)病中的作用，為祛鐵治療MDS提供依據(jù)。
　　 研究對象和方法:
　　 1.選擇MDS初診患者（成人23例和兒童8例）為實驗組，免疫性血小板減少癥(IT

2、P)初診患者（成人12例和兒童8例）為本實驗的近似健康對照組。實驗組入選標(biāo)準(zhǔn)參照WHO(2008)MDS診斷分型，且要求未行輸注紅細(xì)胞和祛鐵治療;實驗組和對照組均排除其它血液系統(tǒng)疾病、嚴(yán)重感染、甲狀腺功能亢進(jìn)等鐵代謝異常的疾病。
　　 2.用無菌注射器分別抽取實驗組和對照組的骨髓液，迅速涂片數(shù)張，后再抽取骨髓液各2-4ml，并迅速打入EDTA抗凝管中。
　　 3.分別抽取實驗組和對照組清晨空腹靜脈血各3ml，肝素抗凝，送

3、至我院生化室檢測血清鐵代謝指標(biāo)。
　　 4.分別對實驗組和對照組骨髓細(xì)胞涂片行鐵染色，光學(xué)顯微鏡下觀察骨髓細(xì)胞外鐵、內(nèi)鐵的分布，記錄并采集圖像保存。
　　 5.應(yīng)用密度梯度離心法分離骨髓單個核細(xì)胞，并分裝2管分別用于總RNA和蛋白的提取，于-80℃保存。
　　 6.參照Trizol試劑說明書提取骨髓單個核細(xì)胞中總RNA，檢測RNA的純度及完整性;應(yīng)用Fermentas第一鏈反轉(zhuǎn)錄試劑盒合成cDNA;采用Real-

4、timePCR測定Mitoferrin-1mRNA、Mitoferrin-2mRNA和ABCB10mRNA的表達(dá)。
　　 7.使用RIPA裂解液提取骨髓單個核細(xì)胞中總蛋白，應(yīng)用WesternBlot分別測定Mitoferrin-1、Mitoferrin-2和ABCB10蛋白的表達(dá)。
　　 結(jié)果:
　　 1.成人MDS患者M(jìn)itoferrin-1mRNA、Mitoferrin-2mRNA和ABCB10mRNA的表達(dá)

5、與對照組比較均無明顯統(tǒng)計學(xué)差異(P＞0.05)。
　　 2.(1)成人低危組即MDS-RA、MDS-RARS患者M(jìn)itoferrin-1蛋白的表達(dá)高于對照組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.001);(2)高危組RAEB患者M(jìn)itoferrin-1蛋白的表達(dá)與對照組比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）;(3)RARS患者M(jìn)itoferrin-1蛋白的表達(dá)高于RA，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.001)(4)MDS患者M(jìn)itoferrin

6、-2蛋白的表達(dá)與對照組比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05);(5)低危組ABCB10蛋白的表達(dá)高于對照組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.001);(6)高危組ABCB10蛋白的表達(dá)與對照組比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05);(7)RARS患者ABCB10蛋白的表達(dá)高于RA，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.001)。
　　 3.MDS患兒Mitoferrin-1mRNA、Mitoferrin-2mRNA和ABCB10mRNA的表達(dá)與對

7、照組比較均無明顯統(tǒng)計學(xué)差異(P＞0.05)。
　　 4.(1)2例RA患兒Mitoferrin-1蛋白的表達(dá)均高于對照組;(2)RAEB患兒Mitoferrin-1蛋白的表達(dá)與對照組相比，差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05);(3)MDS患兒Mitoferrin-2蛋白的表達(dá)與對照組相比，差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05);(4)2例RA患兒ABCB10蛋白的表達(dá)均高于對照組;(5)RAEB患兒ABCB10蛋白的表達(dá)與對照組相比，差異

8、無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)。
　　 結(jié)論:
　　 1.MDS患者M(jìn)itoferrin-1和ABCB10在基因水平上的表達(dá)較對照均無明顯增高，但在蛋白水平上的表達(dá)呈現(xiàn)出異質(zhì)性，低危組（RA、RARS）表達(dá)高于對照組，高危組(RAEB)與對照組相比無明顯增高。
　　 2.MDS患者M(jìn)itoferrin-2在基因和蛋白水平上的表達(dá)較對照均無明顯增高。
　　 3.MDS患者M(jìn)itoferrin-1的表達(dá)可能受轉(zhuǎn)