2023年全國碩士研究生考試考研英語一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁
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文檔簡介

1、目的:構(gòu)建過表達(dá)KLK7基因的前列腺癌細(xì)胞系22RV1-KLK7,利用基于質(zhì)譜的穩(wěn)定同位素標(biāo)記氨基酸細(xì)胞培養(yǎng)的定量蛋白質(zhì)組學(xué)方法,檢測過表達(dá)KLK7的細(xì)胞系22RV1-KLK7與對照細(xì)胞系之間的差異蛋白,探索KLK7所調(diào)控的蛋白表達(dá)譜,并進(jìn)行部分蛋白的實驗驗證,為闡明KLK7在前列腺癌進(jìn)展中的生物學(xué)功能及作用機(jī)制提供蛋白分子基礎(chǔ)。
  方法:1、利用質(zhì)粒轉(zhuǎn)染技術(shù),構(gòu)建穩(wěn)定過表達(dá)KLK7的細(xì)胞系22RV1-KLK7和對照細(xì)胞系22R

2、V1-V,并在mRNA和蛋白質(zhì)水平進(jìn)行驗證;
  2、22RV1-KLK7細(xì)胞培養(yǎng)在含13C或15N標(biāo)記的賴氨酸與精氨酸培養(yǎng)基中,22RV1-V細(xì)胞培養(yǎng)在普通培養(yǎng)基,分別提取兩組細(xì)胞的蛋白質(zhì),定量和變性后進(jìn)行SDS-PAGE電泳,經(jīng)考馬斯亮藍(lán)染色、脫水、酶解、提肽、凍干等步驟,采用液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)對兩組樣品的蛋白質(zhì)進(jìn)行鑒定和定量;
  3、對兩組樣品的搜庫結(jié)果進(jìn)行差異分析,獲得22RV1-KLK7和22RV1-V的差異

3、蛋白譜;4、對以上蛋白集合進(jìn)行生物信息學(xué)分析,尋找差異蛋白所在的主要功能分類、信號通路、相互作用網(wǎng)絡(luò)等;5、選擇差異蛋白中具有生物學(xué)意義的候選蛋白,在mRNA和蛋白質(zhì)水平分別驗證;6、選擇有生物學(xué)意義的候選蛋白,用免疫組織化學(xué)染色技術(shù)在組織微陣列芯片中檢測這些蛋白的表達(dá)水平,并與臨床特征進(jìn)行相關(guān)性分析,尋找可能影響這些蛋白表達(dá)的指標(biāo)。
  結(jié)果:1、本研究成功構(gòu)建穩(wěn)定過表達(dá)KLK7的細(xì)胞系22RV1-KLK7,為后續(xù)蛋白質(zhì)組實驗提

4、供了研究對象;2、質(zhì)譜共定量到2006個蛋白質(zhì),有350個差異蛋白(P<0.01,fold change ratio>1.3或<0.77),其中上調(diào)蛋白137個,下調(diào)蛋白213個;3、生物信息學(xué)分析結(jié)果顯示,KLK7過表達(dá)后上調(diào)蛋白功能分類主要集中在分解代謝、對化學(xué)刺激的響應(yīng)、應(yīng)激反應(yīng)、對凋亡的負(fù)調(diào)控、骨架蛋白介導(dǎo)的過程等功能分類中,下調(diào)蛋白的主要功能分類集中在新陳代謝過程、生物合成、氧化還原等;4、本研究選擇了AGR2和TST兩個上調(diào)

5、蛋白進(jìn)行實驗驗證,結(jié)果顯示22RV1-KLK7的AGR2和TST的mRNA水平相比22RV1-V顯著提高(21.8±6.31 VS1.21±0.21,P<0.01;36.7±7.23 VS1.09±0.16,P<0.01),AGR2和TST蛋白的表達(dá)水平在22RV1-KLK7中顯著升高;5、AGR2和TST蛋白在前列腺癌組織中高度表達(dá),在BPH或正常前列腺組織不表達(dá)或低表達(dá),提示其可作為前列腺癌的候選分子標(biāo)志物。
  結(jié)論:1、本

6、研究成功構(gòu)建了過表達(dá)KLK7基因的前列腺癌上皮細(xì)胞系22RV1-KLK7;2、首次建立了KLK7蛋白在22RV1細(xì)胞系中調(diào)節(jié)的蛋白表達(dá)譜,并初步分析了這些蛋白的生物學(xué)功能,認(rèn)為KLK7蛋白的上調(diào)促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的侵襲與轉(zhuǎn)移;3、驗證了22RV1-KLK7細(xì)胞系中AGR2和TST轉(zhuǎn)錄和表達(dá)水平的升高,證實了蛋白質(zhì)組實驗結(jié)果的可靠性;4、在臨床樣本切片標(biāo)本中進(jìn)一步探索了AGR2和TST蛋白的表達(dá)水平,發(fā)現(xiàn)了AGR2和TST在前列腺癌組織中比正常

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