心磷脂激活NLRP3炎癥小體促進(jìn)非酒精性脂肪肝的機(jī)制研究.pdf

1、目的：
　　構(gòu)建非酒精性脂肪肝小鼠模型，探討心磷脂激活NLRP3炎癥小體而促進(jìn)非酒精性脂肪肝病變的機(jī)制。
　　方法：
　　1.分別使用高脂飼料和低脂飼料喂養(yǎng)C57BL/6J小鼠各10只，16周后取肝臟組織，采用油紅O染色、HE染色、免疫組化染色及血清肝功能測(cè)定，評(píng)估非酒精性脂肪肝模型建立狀況。
　　2.分別提取非酒精性脂肪肝模型組和對(duì)照組小鼠肝組織的總蛋白，采用Western Blot技術(shù)比較兩組標(biāo)本NLRP3的

2、表達(dá)水平。
　　3.分離培養(yǎng)C57BL/6J小鼠Kupffer細(xì)胞。分別用棕櫚酸（模擬體內(nèi)游離脂肪酸在Kupffer細(xì)胞沉積）和生理鹽水（對(duì)照）刺激兩組Kupffe細(xì)胞后，采用Western Blot比較兩組的NLRP3表達(dá)水平；ELISA測(cè)定細(xì)胞培養(yǎng)液上清液的IL-1β水平；用帶His標(biāo)簽的NLRP3過(guò)表達(dá)質(zhì)粒轉(zhuǎn)染Kupffer細(xì)胞，將細(xì)胞培養(yǎng)48h后提取蛋白,用protein-lipid overlay技術(shù)檢測(cè)心磷脂與NLRP

3、3蛋白結(jié)合情況。
　　結(jié)果：
　　1.高脂飲食組較低脂飲食組小鼠的肝臟體積增大、肝細(xì)胞脂肪變性顯著，Kupffer細(xì)胞明顯增生，灶性炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)，外周血ALT顯著增高（高脂組ALT為134.3U/L，低脂組為26U/L）。
　　2.非酒精性脂肪肝模型組小鼠NLRP3炎癥小體表達(dá)水平較對(duì)照組增高了42.16%。
　　3.棕櫚酸刺激的Kupffer細(xì)胞上清較對(duì)照組Kupffer細(xì)胞的上清含有更多的IL-1β，分別是1

4、69.3±6.8 pg/ml and134.6±2.4 pg/ml respectively（p＜0.01）。棕櫚酸刺激組NLRP3蛋白表達(dá)水平較對(duì)照組高103.68%；c-IL-1β蛋白水平也較對(duì)照組高38.78%。將Kupffer細(xì)胞總蛋白孵育PIP strip膜，再用抗His抗體雜交，含心磷脂的孔出現(xiàn)免疫印跡。
　　結(jié)論：
　　1.非酒精性脂肪肝模型構(gòu)建成功。
　　2.NLRP3炎癥小體在非酒精性脂肪肝組織中表達(dá)