HBOP誘導小膠質細胞表型改變在腦出血后的保護作用初步研究.pdf

1、腦出血對于神經(jīng)外科來說，高血壓、創(chuàng)傷后遲發(fā)性腦出血、腦血管疾病都是腦出血的高危因素;顱內手術也必然伴有或多或少的腦出血。腦出血形成的腦血腫和繼發(fā)性腦水腫等，是導致腦出血后腦組織壓迫損傷、缺血缺氧、細胞毒性作用等腦組織損傷的決定性因素。腦水腫可能導致腦電活動、腦血流量和腦組織代謝的改變，控制腦水腫可減輕腦出血后的神經(jīng)功能缺陷。小膠質細胞作為腦組織內定居的單核巨噬細胞系的初級免疫細胞，主要是在腦部炎癥中扮演發(fā)起和參加炎癥反應和神經(jīng)修復的角色

2、，M1型小膠質細胞能夠通過釋放炎癥前反應介質，參與了腦出血后腦組織繼發(fā)性損傷的過程，從而導致神經(jīng)功能缺陷和神經(jīng)細胞死亡。而M2型小膠質細胞又能夠通過下調炎癥因子產生延遲細胞損傷的效應或者通過清除神經(jīng)壞死組織并積極參與神經(jīng)再生。
　　高壓氧治療可以減輕水腫和改善腦部局部缺血缺氧，提高組織內的氧分壓和氧含量，增加損傷組織的氧供給，可以減輕中樞神經(jīng)系統(tǒng)的炎癥反應，減少腦出血/缺血對腦組織的繼發(fā)性損傷，有利于受傷部位的神經(jīng)重塑和神經(jīng)功能修

3、復。據(jù)此，我們提出了高壓氧預適應治療可以通過誘導小膠質細胞表型變化在腦出血后產生神經(jīng)保護作用的假設，本研究分三部分:第一部分構建實驗大鼠的高壓氧預適應模型和大鼠自體血注入腦出血模型。第二部分研究高氧預適應對神經(jīng)炎癥反應和神經(jīng)保護的影響。第三部分探究高壓氧預適應的神經(jīng)保護作用的機制。
　　一、高壓氧預適應在腦出血后早期作用及其研究
　　目的:明確高壓氧預適應在腦出血早期的作用，探討高壓氧預適應在炎癥反應和神經(jīng)功能恢復之中發(fā)揮作

4、用的機制。
　　方法:1.建立SD大鼠自體血注入腦出血模型和高壓氧預適應治療的模型。
　　2.將實驗SD大鼠隨機分為假手術組、腦出血組和高壓氧預適應組3組，每組27只實驗大鼠
　　3.SD大鼠自體血注入腦出血模型構建完成后，進行頭部磁共振掃描檢測模型穩(wěn)定性
　　4.進行術后的行為學評分，評價高壓氧預適應對神經(jīng)功能恢復的影響
　　5.通過干濕重法測定腦水含量，了解高壓氧預適應治療后腦組織炎癥反應的程度變化

5、r>　　6.使用Fluoro-Jade C染色對不同組間神經(jīng)退行性變的程度進行檢測，觀察高壓氧預適應對神經(jīng)衰亡的影響
　　7.應用免疫熒光標記法和免疫印跡分析檢測炎癥因子TNF-α的表達，探究高壓氧預適應對炎癥反應的影響
　　結果:1.高壓氧預適應治療在腦出血后72h表現(xiàn)出明顯的行為學的改善，但在12h、24h并未展現(xiàn)出明顯優(yōu)勢。
　　2.高壓氧預適應治療在12h、24h、72h這3個時間點都有明顯的腦水含量減少

6、>　　3.高壓氧預適應治療后腦組織內的神經(jīng)退行性變程度明顯減輕，衰亡的神經(jīng)細胞數(shù)量明顯減少。
　　4.高壓氧預適應治療后腦組織內的炎癥因子TNF-α表達相對于腦出血組表現(xiàn)出具有統(tǒng)計學意義的減少。
　　結論:高壓氧預適應可在腦出血早期明顯的改善運動功能，并能夠有效減少大鼠腦出血后早期的腦組織水含量，腦出血后早期的炎癥反應在經(jīng)高壓氧預適應處理后被明顯減輕。同時，腦出血后的神經(jīng)退行性變減少，說明了高壓氧預適應治療可在腦出血后發(fā)揮神

7、經(jīng)保護中作用。通過對炎癥因子TNF-α進行測定，發(fā)現(xiàn)高壓氧預適應能夠有效減少腦出血后的關鍵炎癥因子TNF-α的表達，而TNF-α與M1型小膠質細胞呈正相關，說明高壓氧預適應可能誘導了小膠質細胞在腦出血后的表型改變。
　　二、高壓氧預適應治療在腦出血中對小膠質細胞表型的影響
　　目的:研究高壓氧預適應在腦出血炎癥急性期中對小膠質細胞產生的影響，并探究小膠細胞M1型和M2型在此過程中的動態(tài)變化。
　　方法:1.通過免疫熒光

8、標記和免疫印跡分析檢測小膠質細胞標志物Iba-1的表達，觀察高壓氧預適應對小膠質細胞表達量的影響。
　　2.通過免疫熒光雙標和免疫印跡分析檢測小膠質細胞標志物Iba-1與M1型小膠細胞標志物CD11b的比例變化，探究小膠質細胞M1/M2表型在此過程中的動態(tài)改變。
　　結果:1.高壓氧預適應治療后在12h、24h、72h這3個時間點均發(fā)現(xiàn)有相對于腦出血組的小膠質細胞數(shù)量的減少
　　2.高壓氧預適應治療可改變CD11b和I

9、ba-1的陽性表達比例，高壓氧預適應組的CD11b/Iba-1的比例明顯減少。
　　結論:在大鼠腦出血后的炎癥急性期，高壓氧預適應組能夠通過有效減少小膠質細胞的激活來減輕腦出血早期的損傷性炎癥反應過程。同時，高壓氧預適應也可減少小膠質細胞M1型的標志物CD11b比例，這也暗示著M2型小膠質細胞的比例相對的升高。通過相對地減少小膠質細胞的炎癥損傷相關M1型比例、增加神經(jīng)保護相關的M2型來發(fā)揮減輕炎癥反應、減少神經(jīng)退行性變、促進神經(jīng)修