母嬰分離大鼠恐懼記憶易感性差異表達基因的篩選.pdf

1、目的：
　　創(chuàng)傷后應(yīng)激障礙(Posttraumatic Stress Disorder,PTSD)存在較多的易感因素,包括性別、年齡、種族、遺傳因素、父母PTSD病史及早期的不良經(jīng)歷等,生命早期不良應(yīng)激作為重要的易感因素之一,逐漸引起大家的關(guān)注。研究生命早期不良應(yīng)激這一環(huán)境因素導(dǎo)致基因表達的改變,為危險兒童人群的預(yù)防及PTSD的治療尋找有效的藥物作用及心理干預(yù)靶點,具有重要的意義。因此,本課題采用母嬰分離動物模型及場景恐懼記憶動物

2、模型和抑制消減雜交的方法,研究生命早期不良應(yīng)激致成年后恐懼記憶易感性改變的相關(guān)差異表達基因,并分析差異表達基因在易感性機制中的可能作用,探索母嬰分離對成年后恐懼記憶的形成和保持的易感性的影響。
　　方法：
　　第一部分:
　　1、母嬰分離動物模型:
　　幼鼠出生后第1-21天,將所有幼鼠拎出放入另一籠中,6h后將新生幼鼠送回籠中與母鼠團聚,出生后第21天每籠6只飼養(yǎng)。正常對照組大鼠出生后按正常飼養(yǎng),不與母鼠分離。

3、21天后斷奶,每籠6只飼養(yǎng)。
　　2、場景恐懼記憶動物模型:
　　訓(xùn)練:將大鼠輕輕放到大鼠測試籠中,讓其自由活動180秒,然后給予大鼠足部電擊2秒(非條件刺激,US),0.8mA,共三次,每次間隔60秒。訓(xùn)練結(jié)束后,大鼠在訓(xùn)練箱中繼續(xù)停留60秒,然后將其送回飼養(yǎng)籠。訓(xùn)練結(jié)束后1小時和24小時,分別進行場景恐懼記憶保持能力的檢測。
　　3、空間學(xué)習(xí)記憶檢測:
　　前4天為訓(xùn)練階段,每天訓(xùn)練4次,把大鼠面向池壁隨機從

4、任一象限放入池中,并記錄大鼠尋找暗藏的平臺時間(逃避潛伏期)以及上站臺前路程,找到平臺后允許動物在平臺上停留30s;如果大鼠在90s內(nèi)未找到平臺,記為90s。每日4次成績的平均值為當(dāng)日成績。第5天,轍除站臺,記錄大鼠在90s內(nèi)的游泳軌跡,分別計算其跨越目標(biāo)象限內(nèi)的游泳時間和路程占整個游泳時間的百分率。
　　第二部分:
　　應(yīng)用抑制消減雜交技術(shù)(Suppression subtractive hybridization,SSH

5、)篩選母嬰分離組和正常組成年大鼠場景性恐懼記憶之后差異表達基因,將獲得的序列進行同源性比較。
　　結(jié)果：
　　1、行為學(xué)結(jié)果:
　　雌性大鼠在電擊之前母嬰分離組場景恐懼記憶的獲得強于正常組,電擊之后,母嬰分離組場景恐懼記憶的獲得弱于正常組。而雄性大鼠在電擊之前和電擊之后場景性恐懼記憶的獲得的差異均無統(tǒng)計學(xué)意義。
　　場景恐懼記憶的保持,1h后短時記憶的檢測,雌性大鼠母嬰分離組僵直時間明顯低于正常組(P<0.01)

6、;雄性大鼠母嬰分離組僵直時間與正常組相比差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P=0.673)。同時母嬰分離對成年后場景恐懼記憶的保持存在性別差異,母嬰分離組雌性大鼠僵直時間明顯低于雄性大鼠(P<0.01)。
　　24h長時記憶檢測,在恐懼記憶訓(xùn)練后,雌性大鼠母嬰分離組僵直時間明顯低于正常組(P<0.01);雄性大鼠母嬰分離組僵直時間與正常組相比差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P=0.093)。同時母嬰分離對成年后場景性恐懼記憶的保持存在性別差異,母嬰分離組雌性大

7、鼠僵直時間明顯低于雄性大鼠(P<0.01)。
　　空間學(xué)習(xí)記憶檢測結(jié)果:雌性和雄性大鼠母嬰分離組潛伏期、上臺前路程與對應(yīng)的對照組相比差異無統(tǒng)計學(xué)意義;在空間探索實驗中,雌、雄性大鼠母嬰分離組目標(biāo)象限停留時間的百分比、目標(biāo)象限停留距離的百分比均與對照組相比差異無統(tǒng)計學(xué)意義。
　　2、SSH結(jié)果:
　　獲得9個上調(diào)表達的基因,其中5個為已知基因的部分序列,1個為新EST序列,此基因表達均是在母嬰分離的基礎(chǔ)上獲得。