哮喘大鼠差異表達基因篩選及柴樸湯的干預研究.pdf

1、目的：
　　利用基因芯片技術篩選哮喘大鼠及應用柴樸湯干預治療后不同時段肺組織中異常表達的基因，闡明哮喘的發(fā)病機制及柴樸湯作用的靶基因。
　　方法：
　　健康SD大鼠(體重150~200g)42只，隨機表隨機分為正常對照組與哮喘模型組及柴樸湯干預組。用卵蛋白（OVA）致敏激發(fā)建立大鼠哮喘模型。分別于2、4、8周處死大鼠收集肺泡灌洗液行炎性細胞及嗜酸性粒細胞計數(shù)，取肺組織行HE染色、病理圖像分析，提取肺組織RNA行基因芯片

2、篩選，以基因表達倍數(shù)值2.0和基因表達倍數(shù)值－2.0為閾值來確定差異表達基因，然后用 GO及Pathway分析對差異表達基因進行功能分類分析。并對基因芯片結果進行實時定量PCR驗證。
　　結果：
　　1.各組大鼠肺泡灌洗液中炎性細胞分類計數(shù)
　　對照組肺泡灌洗液中炎性細胞及嗜酸性粒細胞數(shù)均明顯低于哮喘模型組，差異有顯著性（P<0.01）；隨著激發(fā)時間的延長，哮喘模型組及柴樸湯干預組中炎性細胞及嗜酸性粒細胞數(shù)逐漸增加，差

3、異有顯著性（P<0.01）；炎性細胞及嗜酸性粒細胞數(shù)在柴樸湯干預組中比哮喘模型組中均有所減少，差異有顯著性（P<0.01）。
　　2.哮喘大鼠氣道重塑的改變
　　大鼠哮喘激發(fā)后二周開始出現(xiàn)支氣管壁周圍有大量炎癥細胞浸潤,氣道平滑肌增厚,杯狀細胞增生,伴黏液高分泌,膠原過度沉積，基底膜增厚；哮喘四周組與二周組相比，氣道平滑肌明顯增厚,氣道壁更厚，差異有顯著性（P<0.01）；哮喘八周組與四周組相比，氣道平滑肌明顯增厚,管腔更狹

4、窄，差異有顯著性（P<0.01）。
　　3.各組大鼠基因芯片篩選及實時定量PCR驗證
　　從24358條表達基因譜中，篩選出在哮喘疾病的進展過程中及柴樸湯的治療過程中持續(xù)性差異表達2倍以上的基因有13條，它們涉及哮喘的防御反應、免疫反應、細胞凋亡、神經(jīng)調節(jié)等功能有關。其中發(fā)現(xiàn)Mal、TPD52L1等新基因參與哮喘疾病過程。對Mal、TPD52L1基因進行實時定量PCR驗證，結果顯示這兩個基因在不同組大鼠標本中均有異常表達，且