冠心病猝死者心肌細(xì)胞內(nèi)熱休克反應(yīng)改變的意義研究.pdf

1、1940年以來，歐美發(fā)達(dá)國家冠心病(CHD)己上升為第一位的死亡原因。我國衛(wèi)生部心血管病防治研究中心編寫的《中國心血管病報告2005》是我國發(fā)布的第一部中國心血管病權(quán)威報告，年報揭示我國每年新發(fā)心肌梗死50萬人，每年死于心血管病的人數(shù)約為300萬人，約占總死亡人數(shù)的45％，因此，自1980年以后我國廣大地區(qū)居民，特別是城市居民冠心病也逐步上升為第一位的死亡原因；且發(fā)病年齡逐漸年輕化，其危害性越來越凸現(xiàn)。在冠心病治療領(lǐng)域，盡管心血管藥物的

2、進(jìn)展、起博器的安裝、經(jīng)皮心臟介入(PTCI)的使用、心臟血管搭橋(CABG)術(shù)等先進(jìn)的治療手段或方法取得了長足的進(jìn)步，但是冠心病的死亡率，特別是冠心病猝死的發(fā)病率依舊穩(wěn)升不降。近年來有研究表明，熱休克反應(yīng)(heat shock response，HSR)及其相關(guān)因子如熱休克轉(zhuǎn)錄因子(heat shock transcriptional factor 1，hsfl)及熱休克蛋白(heat shock proteins，HSPs)對冠心病有

3、重要的病理生理效應(yīng)，這些古老的生物因子，獨辟蹊徑地對心臟發(fā)揮了非常重要的保護(hù)作用，但目前仍少見冠心病猝死者心肌細(xì)胞內(nèi)hsfl、HSP70和HO-1(heme oxygenase 1)基因的改變及其相互關(guān)系對心肌細(xì)胞病理生理作用的研究報道。 目的：探討冠心病猝死者患側(cè)心肌細(xì)胞內(nèi)熱休克反應(yīng)改變的臨床意義及其熱休克反應(yīng)因子hsfl、HSP70和HO-1之間的相互關(guān)系。 材料與方法： 收集2005年12月至2006年12

4、月經(jīng)中山大學(xué)法醫(yī)鑒定中心鑒定，尸體解剖及組織病理證實為符合冠心病猝死病例，分為研究A組，18例急性心肌梗死猝死者(12例男性，6例女性，年齡46.7±7.9歲)；研究B組，21例冠心病非急性心肌梗死猝死者(12例男性，9例女性，年齡46.7±10.1歲)。同期收集17例無病外傷在0～2h內(nèi)意外死亡者(10例男性，7例女性，其中，年齡47.3±10.2歲)為正常對照。 死亡距尸解時間平均為48±18h(4～60h)，尸解前尸體均存

5、放于-4℃冰柜中，辦完法律手續(xù)后即行尸解。研究組取病變組織或病變血管供血區(qū)2cm3心肌組織大小4～5塊，一部分組織于10％甲醛液中固定以做HE染色及免疫組化實驗，一部分組織于-70℃下凍存以做分子生物學(xué)實驗。正常對照組抽樣取同部位2cm3大小心肌組織4～5塊，用同樣方法進(jìn)行保存以備后續(xù)研究。用HE染色法檢測心肌細(xì)胞的病理改變；用免疫組化法檢測hsfl、HSP70和HO-1基因在心肌細(xì)胞中的蛋白表達(dá)部位和含量，運用圖像分析系統(tǒng)進(jìn)行分析，統(tǒng)

6、計學(xué)方法比較三組的積分光密度；用RT-PCR方法同步檢測hsfl、HSP70和HO-1基因在心肌細(xì)胞中的mRNA表達(dá)量，并探討它們之間的相互關(guān)系；數(shù)據(jù)用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差((-x)±s)表示，用SPSS13.0統(tǒng)計軟件進(jìn)行分析。定P<0.05為差異有顯著性。 結(jié)果在冠心病急性心肌梗死猝死者和冠心病非急性心肌梗死猝死者(研究A和B組)患側(cè)心肌細(xì)胞內(nèi)hsfl的mRNA表達(dá)量分別為0.9562±0.1344和0.9605+0.1623、HS

7、P70的mRNA表達(dá)量分別為0.8408±0.0583和O．8369±0.0498和HO-1的mRNA表達(dá)量則分別為0.9181±0.1612和0.8863±0.1833，都顯著高于hsfl、HSP70和HO-1的mRNA在正常對照組中的表達(dá)量0.4499±0.1351、0.1046±0.0340和0.0862±0.0531(P均<0.001)；但研究A組和研究B組兩組之間差異無顯著性(P均>0.05)；且hsfl mRNA、HSP70

8、 mRNA和HO-1mRNA表達(dá)量三者中兩者之間均呈顯著正相關(guān)關(guān)系(P均<0.001)。 免疫組化結(jié)果檢測表明，在冠心病急性心肌梗死猝死者和非急性心肌梗死猝死者(研究A和B組)患側(cè)心肌細(xì)胞內(nèi)hsfl蛋白表達(dá)量(即光密度積分)分別為886.00±74.99和853.00±64.76、HSP70蛋白表達(dá)量分別為3556.68±574.19和3396.00±657.82和HO-1蛋白表達(dá)量分別為4336.68±865.30和4018.

9、32±697.64，都顯著高于hsfl、HSP70和HO-1蛋白在對照組中表達(dá)量304.08±82.95、289.21±68.51和1556.78±506.26(P均<0.01)；其中hsfl蛋白主要在心肌細(xì)胞核內(nèi)表達(dá)，HSP70和HO-1蛋白主要在心肌細(xì)胞漿內(nèi)表達(dá)，但HO-1蛋白在所有研究對象中某些細(xì)胞核內(nèi)都有弱表達(dá)；冠心病急性心肌梗死猝死者和非急性心肌梗死猝死者心肌細(xì)胞內(nèi)hsfl、HSP70和HO-1蛋白表達(dá)無顯著差異(P>0.05

10、)，HO-1在對照組細(xì)胞漿和細(xì)胞核內(nèi)也有表達(dá)。 結(jié)論：冠心病急性心肌梗死猝死者和冠心病非急性心肌梗死猝死者患側(cè)心肌細(xì)胞內(nèi)hsfl、HSP70和HO-1的mRNA和蛋白表達(dá)均顯著提高，提示hsfl、HSP 70和HO-1它們可能共同參與了心肌缺血損傷，特別是急性心肌梗死的病理生理過程；在心肌缺血過程中，hsfl基因的表達(dá)改變提示，這一過程可能是熱休克反應(yīng)的另一調(diào)節(jié)途徑；HO-1在心肌細(xì)胞漿和細(xì)胞核內(nèi)改變可能具有普遍性，但在缺血組織