柚皮素對(duì)CYP3A代謝酶和P-糖蛋白轉(zhuǎn)運(yùn)體影響的研究.pdf

1、柚皮素（Naringenin, NGR）是一種二氫黃酮類(lèi)化合物，在中藥中廣泛存在。現(xiàn)代藥理學(xué)研究表明NGR具有較強(qiáng)的藥理活性，如抗氧化、降血脂、抗腫瘤、抗動(dòng)脈粥樣硬化。本研究基于細(xì)胞色素 P4503A（cytochrome P4503A, CYP3A）和P-糖蛋白（P-glycoprotein, P-gp）調(diào)節(jié)交疊性，研究NGR對(duì)代謝酶CYP3A和血腦屏障的多藥耐藥蛋白P-gp的影響。主要內(nèi)容如下：
　　1.改進(jìn)生物樣品分析方法<

2、br>　　改進(jìn)微透析液及血漿中咪達(dá)唑侖（midazolam, MDZ）/1′-羥基咪達(dá)唑侖（1′-hydroxymidazolam,1′-OH MDZ）的LC-MSn方法，大鼠腦微血管內(nèi)皮細(xì)胞（rat brain microvascular endothelial cells, rBMECs）中地高辛（digoxin, DIG）的LC-MSn方法，羅丹明123（Rhodamine123, Rho123）的高效液相色譜熒光法。
　　

3、實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示微透析液中MDZ、1′-OH MDZ峰形較好，在5 min內(nèi)即可完成一次分析，MDZ和1′-OH MDZ的線性范圍分別為0.78～100和0.195～12.5μg·L-1，最低定量下限0.2μg·L-1，批內(nèi)、批間RSD均＜7％，RE值在-1.34%～-8%范圍內(nèi)。大鼠血漿樣品中MDZ和1′-OH MDZ的線性范圍分別為15.63～8000、3.91～1000μg·L-1.
　　DIG與內(nèi)標(biāo)分離較好，在5 min內(nèi)即可

4、完成一次分析，樣品處理簡(jiǎn)單，線性范圍為5～160μg·L-1，最低定量下限5μg·L-1.分析物Rho123的色譜峰峰型好，細(xì)胞中的雜質(zhì)不干擾目標(biāo)峰，其保留時(shí)間4.7 min，線性范圍為1～16μg·L-1.
　　2. NGR對(duì)代謝酶CYP3A的影響研究
　　確立腦微透析聯(lián)合頸靜脈取血方法，比較靜脈注射N(xiāo)GR前后大鼠腦內(nèi)及血漿中MDZ/1′-OH MDZ的藥代動(dòng)力學(xué)過(guò)程。
　　微透析探針植入大鼠側(cè)腦室，分別靜脈注射5%

5、β-環(huán)糊精（對(duì)照組）和3.75，7.5，15 mg·kg-1 NGR（給藥組），5 min后靜脈注射MDZ（劑量為5 mg·kg-1），同時(shí)連續(xù)收集腦透析液樣品及血漿樣品（按3，7，15，30，60，90，120，150 min采血點(diǎn)進(jìn)行采樣），采用LC-MSn測(cè)定MDZ/1′-OH MDZ濃度，腦內(nèi)藥物濃度經(jīng)探針回收率校正后，用WinNonlin軟件計(jì)算MDZ/1′-OH MDZ的藥動(dòng)學(xué)參數(shù)。
　　結(jié)果顯示給予NGR后，腦中MD

6、Z、1′-OH MDZ藥代參數(shù)改變。3.75 mg·kg-1 NGR組中MDZ的Ke減小，t1/2升高，MRT0-∞增加；而15 mg·kg-1 NGR組中Ke降低，t1/2、MRT0-∞增加，1′-OH MDZ的MRT0-∞增加。
　　股靜脈給予NGR，血漿中MDZ、1′-OH MDZ的藥代參數(shù)改變。3.75 mg·kg-1 NGR組中MDZ的Ke升高，MRT0-t、t1/2減小，AUC0-t、AUC0-∞顯著性降低， CL、V

7、d顯著性增加。7.5 mg·kg-1 NGR組中1′-OH MDZ的AUC0-t增加，MRT0-t顯著性降低。而15 mg·kg-1 NGR組中MDZ的t1/2升高，AUC0-t、AUC0-∞顯著性增加，MRT0-t、MRT0-∞降低。
　　3. NGR對(duì)轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白P-gp的影響研究
　　確立rBMECs的藥物攝取模型，在此模型基礎(chǔ)上研究DIG和Rho123的攝取特性及NGR（50μmol·L-1）對(duì)二者攝取的影響。
　

8、　實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明DIG在rBMECs攝取具有時(shí)間依賴(lài)性，10～90 min細(xì)胞內(nèi)DIG含量隨時(shí)間延長(zhǎng)而增加，90～120 min之間達(dá)攝取穩(wěn)態(tài)。與對(duì)照組相比，在40 min時(shí)NGR使攝取量增加了76.2%，90 min時(shí)增加了75.9%. Rho123在rBMECs攝取同樣具有時(shí)間依賴(lài)性，10～60 min細(xì)胞內(nèi)Rho123含量隨時(shí)間延長(zhǎng)而增加，60～120 min之間達(dá)攝取穩(wěn)態(tài)。與對(duì)照組相比，在60 min時(shí)NGR使攝取量增加了28.5