Zn2+在黑水虻幼蟲(chóng)血淋巴內(nèi)累積及對(duì)酶活性和蛋白質(zhì)影響的初步研究.pdf

1、目的：用不同濃度Zn2+處理的人工飼料連續(xù)3代飼養(yǎng)黑水虻幼蟲(chóng)，研究Zn2+在黑水虻幼蟲(chóng)血淋巴中的累積及對(duì)血淋巴內(nèi)CAT、T-AOC、PO、MT和4KD、8KD小分子蛋白的含量以及蛋白氨基酸序列的影響，為黑水虻幼蟲(chóng)無(wú)害化處理糞便系統(tǒng)的運(yùn)行及其副產(chǎn)品的研發(fā)提供理論依據(jù)。
　　方法：將不同濃度Zn2+（75、150、300、600、1200mg/kg）添加到人工飼料中并連續(xù)3代飼養(yǎng)黑水虻幼蟲(chóng)。用等離子體原子發(fā)射光譜儀測(cè)定Zn2+在第1、

2、3代黑水虻5齡幼蟲(chóng)血淋巴內(nèi)累積情況；用ELISA法檢測(cè)第1、3代5齡幼蟲(chóng)血淋巴中CAT、T-AOC的活力和PO、MT的含量；用微量核酸檢測(cè)儀檢測(cè)各個(gè)處理濃度下超濾離心后第1、3代5齡幼蟲(chóng)血淋巴中小分子蛋白總含量；用Tricine-SDS-PAGE對(duì)第3代5齡幼蟲(chóng)血淋巴中小分子蛋白進(jìn)行初步分離；用MALDI-TOF和LC-MS-MS對(duì)第3代5齡幼蟲(chóng)血淋巴中小分子蛋白進(jìn)行分析。
　　結(jié)果：(1)不同濃度Zn2+連續(xù)3代脅迫黑水虻幼蟲(chóng)，

3、Zn2+可以在幼蟲(chóng)血淋巴內(nèi)累積。第1、3代血淋巴中Zn2+含量隨著Zn2+處理濃度的增加而升高，各處理濃度組與對(duì)照組相比均存在顯著差異(P<0.05)；第3代除150mg/kg處理組與300mg/kg處理組相比無(wú)顯著性差異，其它各處理組間均存在顯著性差異(P<0.05)；第3代幼蟲(chóng)血淋巴內(nèi)Zn2+含量顯著高于第1代幼蟲(chóng)血淋巴內(nèi) Zn2+含量(P<0.05)。(2)當(dāng) Zn2+處理濃度在75-300mg/kg范圍內(nèi)時(shí)，第1、3代5齡幼蟲(chóng)血

4、淋巴中CAT、T-AOC的酶活力隨著Zn2+處理濃度增加而增強(qiáng)，PO、MT含量隨著 Zn2+處理濃度增加而增多；處理濃度在600-1200mg/kg范圍內(nèi)時(shí)，CAT、T-AOC的酶活力及PO、MT含量均隨Zn2+處理濃度增加而降低。75-300mg/kg處理濃度的Zn2+脅迫黑水虻幼蟲(chóng)，可以使血淋巴中CAT、T-AOC的酶活力與PO、MT含量增長(zhǎng)并隨世代增加呈上升趨勢(shì)。(3) Zn2+處理濃度在75-300mg/kg范圍內(nèi)時(shí)，小分子蛋白

5、總含量隨著Zn2+處理濃度增加而增多，當(dāng)處理濃度為600-1200mg/kg范圍內(nèi)時(shí)小分子蛋白總含量則隨Zn2+處理濃度增加而降低；第3代小分子蛋白總含量顯著低于第1代小分子蛋白總含量(P<0.05)。(4)利用Tricine-SDS-PAGE電泳對(duì)第3代5齡幼蟲(chóng)血淋巴內(nèi)小分子蛋白進(jìn)行分離，各個(gè)處理濃度下幼蟲(chóng)血淋巴內(nèi)蛋白均出現(xiàn)兩條目的條帶，且在75-300mg/kg處理范圍時(shí)隨著Zn2+處理濃度的增加，目的條帶清晰度逐漸增強(qiáng)；600-1

6、200mg/kg處理范圍時(shí)，則隨著Zn2+處理濃度增加目的條帶減弱。(5)利用LC-MS-MS分析蛋白一級(jí)結(jié)構(gòu)，對(duì)照組和1200mg/kg處理組的4KD蛋白中均檢測(cè)出四組氨基酸序列，其中有3組氨基酸序列不同。
　　結(jié)論：(1) Zn2+在黑水虻幼蟲(chóng)血淋巴中累積并隨世代增加累積量增加。(2)小于300mg/kg的Zn2+脅迫會(huì)增強(qiáng)第1、3代黑水虻幼蟲(chóng)血淋巴酶活力，大于600mg/kg的Zn2+則抑制酶活力，且CAT、T-AOC的酶活