他達那非對分流型肺動脈高壓大鼠心肌肥厚及Cx43的影響.pdf

1、目的：肺動脈高壓(pulmonary artery hypertension，PAH)屬于肺循環(huán)疾病，是由多種因素引起的以肺動脈壓力和肺血管阻力升高為特點的臨床病理生理綜合征，最終會導(dǎo)致右心衰竭和死亡。現(xiàn)在研究已經(jīng)證實縫隙連接蛋白Cx43(connexin43)在許多疾病的發(fā)生和發(fā)展過程中起著重要的作用，例如冠心病，心律失常，腫瘤以及心室肥厚等。本實驗旨在通過建立分流型肺動脈高壓大鼠模型，模擬先天性心臟病所致的肺動脈高壓及右心室肥厚，探

2、討他達那非對分流型肺動脈高壓大鼠心肌肥厚的影響及Cx43的變化情況。
　　方法：健康雄性SD大鼠24只(體重250-290克)，隨機分為3組：A組(假手術(shù)組)：麻醉后大鼠開腹部，暴露腹主動脈和下腔靜脈，鉗夾腹主動脈上方近腎動脈處30s后關(guān)腹，術(shù)后第4周開始使用生理鹽水灌胃；B組(手術(shù)組)：麻醉后開腹行腹主動脈-腔靜脈造瘺手術(shù)，術(shù)后第4周開始使用生理鹽水灌胃；C組(他達那非組)：麻醉后開腹行腹主動脈-腔靜脈造瘺手術(shù)，術(shù)后第4周開始使

3、用他達那非(10mg/kg/d)灌胃。B，C兩組大鼠均取仰臥位，腹部正中切口，暴露腹主動脈和下腔靜脈，鉗夾腹主動脈上方近腎動脈處，用一次性18G穿刺針穿刺，穿刺點為腹主動脈腎動脈分支處到腹主動脈分叉為兩側(cè)髂總動脈間的中下1/3處，于腹腔動靜脈聯(lián)合部動靜脈壁處刺破進入下腔靜脈形成瘺口，拔出穿刺針，以一滴氰基丙基酸鹽粘合劑封住穿刺口。30s后血管鉗松開，若可觀察到下腔靜脈增粗、顏色由暗變紅或有波動血流，則證實分流存在，即可關(guān)腹，放入鼠盒中繼

4、續(xù)飼養(yǎng)待第6周后，再次麻醉大鼠，開胸用微導(dǎo)管直接測量大鼠血流動力學(xué)指標，包括體循環(huán)平均動脈壓(mPA)，平均肺動脈壓(mPAP)，右心室收縮中末壓(RVSP)，右心室壓力上升最大速率(dp/dtmax)。經(jīng)頸內(nèi)動脈采集動脈血測量血清中一氧化氮(NO)濃度。后取出大鼠心臟，切去心房，測量并計算右心室(RV)與全心(H)質(zhì)量比值及右心室(RV)與體重(BW)質(zhì)量比值。右心室心肌經(jīng)Masson染色觀察心肌纖維化程度及心肌膠原容積百分比(CVF

5、)變化；經(jīng)免疫組化染色法和Western-blot方法觀察心肌Cx43的變化情況。
　　用SPSS13.0統(tǒng)計軟件進行統(tǒng)計分析，所有數(shù)據(jù)均以x-±s表示，組間比較采用單因素方差分析，P<0.05認為對比組之間的差異有統(tǒng)計學(xué)意義。
　　結(jié)果：
　　1血流動力學(xué)結(jié)果：
　　本實驗結(jié)果顯示與A組大鼠相比，B組大鼠mPAP，RVSP顯著升高，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)，dp/dtmax無明顯變化，差異無統(tǒng)計學(xué)意義(

6、P>0.05)；經(jīng)他達那非治療后的C組大鼠mPAP，RVSP顯著降低，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)，dp/dtmax顯著升高，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。各組大鼠mPA差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。
　　2右心室肥厚相關(guān)比值：
　　與A組大鼠相比，B組大鼠RV/H，RV/BW顯著升高，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)，經(jīng)他達那非治療后的C組大鼠RV/H，RV/BW顯著降低，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。

7、r>　　3血清NO濃度：
　　與A組大鼠相比，B組大鼠血清NO濃度顯著降低，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)；經(jīng)他達那非治療后的C組大鼠血清NO濃度顯著升高，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。
　　4心肌膠原容積百分比(CVF)：
　　與A組大鼠相比，B組大鼠心肌CVF明顯升高，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)；經(jīng)他達那非治療后的C組大鼠心肌CVF明顯降低，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。
　　5心肌Cx43

8、Western-blot結(jié)果：
　　A組、B組、C組大鼠心肌Cx43表達量無顯著差別，差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。
　　6光鏡結(jié)果：
　　6.1右心室心肌Masson染色結(jié)果：
　　假手術(shù)組(A組)大鼠心肌細胞排列整齊，肌間隙僅可見少量膠原纖維；手術(shù)組(B組)大鼠心肌細胞明顯肥大，間距增大，心肌纖維排列紊亂，肌間隙可見大量藍染的膠原蛋白；經(jīng)他達那非治療后的C組大鼠心肌細胞明顯縮小，間距縮短，心肌細胞排列較為

9、整齊，肌間隙膠原蛋白明顯減少。
　　6.2免疫組化Cx43結(jié)果：
　　假手術(shù)組(A組)大鼠Cx43集中分布于細胞端-端連接處，側(cè)-側(cè)連接處較少，且排列整齊；手術(shù)組(B組)大鼠Cx43在細胞側(cè)-側(cè)連接處分布增多，端-端連接處明顯減少，且排列紊亂；經(jīng)他達那非治療后的C組介于兩者之間。
　　結(jié)論：
　　他達那非能夠有效降低分流型肺動脈高壓大鼠肺動脈壓力，抑制右心室肥厚及心肌纖維化，影響Cx43分布，改善右心室功能，同時