順鉑磁性熱敏性脂質體分子設計和組裝.pdf

1、順鉑是一種臨床常用的細胞周期非特異性強效抗癌藥，對于多種實體細胞瘤如黑色素瘤、頭頸部癌、非小細胞肺癌等都具有抑制細胞活性作用。盡管順鉑在治療癌癥過程中能夠起到很好的療效，但其體內毒性較大，易引起嚴重的胃腸道反應、腎毒性、耳毒性等毒副反應而影響了臨床應用。因此如何使順鉑能夠選擇性到達腫瘤細胞，降低藥物毒性提高治療效果是現(xiàn)階段研究的主要方向。
　　磁性熱敏性脂質體是將磁性材料和藥物包裹在脂質體內的新型靶向制劑，給藥后在身體的局部施加固

2、定磁場以增加其在局部滯留時間提高其靶向性，隨后在溫熱刺激下快速釋放藥物起到局部殺傷效果，可減少對正常組織的影響，提高藥物的治療效果。
　　目的：對順鉑磁性脂質體的分子組裝方式進行設計，通過選用適合的磷脂前體，設計合理的制備過程，來改善脂質體的載藥率，提高其靶向性。此外對二棕櫚酰磷脂酰膽堿(DPPC)與多種金屬離子的相互作用進行研究，探討金屬離子輔助載藥的模式和機理，為提高脂質體的載藥率提供新的途徑。
　　方法：
　　采

3、用改良水熱合成方法一步制備表面被有機基團修飾的Fe3O4磁性納米顆粒，對磁性顆粒進行XRD、TEM、IR表征。以天然蛋黃卵磷脂(EPC)為原料，采用石墨爐原子吸收分光光度法測定順鉑含量，以包封率為指標討論磁性脂質體不同制備方法。利用薄膜分散法對影響磁性脂質體包封率的處方因素進行正交實驗，確定脂質體最佳制備和處方工藝。
　　利用EPC為磷脂材料，在篩選出來的最佳制備條件下，以順鉑抗癌藥物為模型藥物，探討薄膜分散法制備脂質體過程中磁性

4、顆粒不同的加入順序對脂質體微觀結構的影響，即程序Ⅰ：將磁性顆粒先與磷脂結合再成膜制備脂質體；程序Ⅱ：將磁性顆粒分散于藥物溶液中水合制備脂質體。通過透射電鏡對脂質體微觀結構進行觀察，尋找適合的納米磁性脂質體的組裝方式并對其進行體外釋放實驗。
　　以DPPC為原料，分別利用兩種程序制備順鉑磁性熱敏性脂質體，從分子水平探討單一組分的磷脂前體對合成的脂質體理化性質的影響，并對脂質體穩(wěn)定性及藥物體外釋放進行質量評價。通過動物實驗對磁性脂質體

5、的磁靶向性進行研究考察。利用差熱分析、紅外光譜和拉曼光譜對4種金屬離子(Zn2+，Cu2+，Mn2+，Mg2+)與DPPC的相互作用機理進行分析，并制備金屬離子輔助載藥的脂質體，探討其提高載藥率的機理。
　　結果：
　　改良水熱法制備Fe3O4磁性納米顆粒的方法不需要高溫和氮氣保護，生成的粒子粒徑為8.9nm，具有超順磁性，且表面被有機基團所修飾可提高其親油性，增加與磷脂的結合能力。
　　選用葡聚糖Sephadex G

6、-50凝膠柱對磁性脂質體與游離藥物進行分離。確定采用薄膜分散法制備順鉑磁性脂質體，經(jīng)正交實驗設計篩選了制備磁性脂質的最優(yōu)處方為EPC濃度=100 mg·mL-1；EPC：CH=7:1(w/w)；EPC：Fe3O4=5:1(w/w)；順鉑濃度=1 mg·mL-1。
　　利用EPC為磷脂材料考察兩種不同制備程序對脂質體微觀結構的影響，透射電鏡觀察發(fā)現(xiàn)，程序Ⅰ制備的脂質體磁性顆粒分布于磷脂雙層中，而程序Ⅱ制備的脂質體磁性顆粒分布于脂質體

7、中間水相。采用程序Ⅰ制備的磁性脂質體在藥物包封率和磁性顆粒的含量上都優(yōu)于程序Ⅱ，藥物包封率分別為34.90±3.31％和28.34±4.72％，磁性顆粒的包封率分別為4.19±1.70和3.05±3.13 mg·mL-1，同時磁性脂質體藥物包封率均高于普通脂質體。上述3種不同脂質體體外釋藥均符合一級釋藥規(guī)律，能保證一定的緩釋效應。
　　DPPC作為熱敏性磷脂材料，為保證脂質體的熱敏性確定了以DPPC：CH為7:1制備脂質體。程序Ⅰ

8、制備的磁性脂質體同樣使磁性顆粒均勻分散在磷脂雙層中，并且磁性顆粒和藥物的裝載量均較高分別為33.51％±3.30％和2.34±0.09 mg·mL-1。與EPC相比，DPPC制備的磁性脂質體囊泡粒徑較小，且均勻性和磁性顆粒在磷脂層中的分散性更好。DSC與體外熱敏釋放共同證明了順鉑磁性熱敏性脂質體具有良好的熱敏性，并且通過動物實驗證明了其在體內具有明顯的磁靶向，可以有效運載順鉑至靶部位。
　　由于金屬離子與DPPC的磷脂酰基團產(chǎn)生靜

9、電力作用改變了DPPC的構象，導致了脂質分子碳氫鏈排列更緊密，從而使Tm升高，并且隨著金屬離子原子序數(shù)的增加，半徑減小，陽離子單位體積的電荷密度增加，金屬離子與DPPC分子間的靜電作用加強。金屬離子輔助載藥脂質體的藥物包封率均明顯高于普通脂質體，并且仍能保持著良好的熱敏釋藥性。
　　結論：以改良水熱法制備的Fe3O4磁性納米顆粒為磁性材料，通過先將磁性顆粒與磷脂相結合的方法制得到磁性顆粒能均勻分散在磷脂雙層中，且磁性顆粒和藥物的裝