糖尿病與心腦血管病雙功能口服藥物rolGLP-HV生產(chǎn)菌的構(gòu)建及功能研究.pdf

1、糖尿病(DM)是胰島素絕對(duì)或相對(duì)分泌不足以及機(jī)體對(duì)胰島素敏感性降低所引起的代謝紊亂，其主要臨床特征為血糖高、血脂高以及高粘血癥等。如今，糖尿病已成為“百病之源”，它往往會(huì)帶來(lái)一系列的并發(fā)癥，這些并發(fā)癥給患者帶來(lái)了更為嚴(yán)重的后果。研究表明，糖尿病患者死亡率最高的為心腦血管病變，約占80％，糖尿病人患腦血栓的發(fā)病率為非糖尿病人的12倍。因此，在糖尿病的治療中，找到一種治療糖尿病同時(shí)又能有效預(yù)防和治療心腦血管疾病等并發(fā)癥的治療方法或藥物具有十

2、分重要的意義。
　　 胰高血糖素樣肽-1(GLP-1)，是一種能增加胰島素分泌的腸道激素，對(duì)于糖尿病的治療具有重要意義。有關(guān)重組口服長(zhǎng)效促胰島素(rolGLP-1)的研究已證明可明顯減低糖尿病大鼠血糖水平，并能改善由于高血糖引起的異常體征，對(duì)2型糖尿病具有良好的治療效果。
　　 水蛭素(HV)是從醫(yī)蛭(Hirudomedieinalis)唾液腺中分離的一種酸性小分子蛋白，是目前發(fā)現(xiàn)的最好的凝血酶抑制劑，在預(yù)防和治療人類(lèi)心

3、腦血管疾病方面有著非常顯著的療效，是治療心腦血管疾病的首選良藥。
　　 本研究采用分子克隆手段獲得了長(zhǎng)效促胰島素和水蛭素融合基因rolGLP-HV，克隆到pET22b(+)載體轉(zhuǎn)化大腸桿菌BL21(DE3)并實(shí)現(xiàn)了高效表達(dá)。采用凝血酶滴定法檢測(cè)rolGLP-HV的抗凝活性，結(jié)果表明rolGLP-HV的抗凝活性為109±1.7 ATU/ml，證明rolGLP-HV具有HV的抗凝血功能。
　　 采用血栓模型對(duì)rolGLP-H

4、V的抗血栓活性進(jìn)行了檢測(cè)。在昆明小鼠背部皮下注射卡拉膠(50mg/kg)的同時(shí)給小鼠灌胃rolGLP-HV，觀察小鼠尾部出現(xiàn)血栓的時(shí)間及血栓的相對(duì)長(zhǎng)度。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，灌胃rolGLP-HV的小鼠出現(xiàn)血栓的時(shí)間比對(duì)照延遲致32h，相對(duì)長(zhǎng)度從37.5%縮減到25%，說(shuō)明口服rolGLP-HV確實(shí)可以起到抗血栓作用。
　　 采用STZ誘導(dǎo)的2型糖尿病小鼠模型對(duì)rolGLP-HV的降血糖功能進(jìn)行了檢測(cè)。按照15mg/kg的劑量連續(xù)10天給糖

5、尿病小鼠灌胃rolGLP-HV，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，實(shí)驗(yàn)組小鼠的血糖明顯降低，從10.6 mmol/L降到了5.3mmol/L，基本恢復(fù)到了正常血糖水平；同時(shí)實(shí)驗(yàn)組的攝食量和飲水量降低，體重亦趨于恢復(fù)，其多食、多飲、多尿和消瘦的癥狀都得到有效改善。
　　 本研究的所有實(shí)驗(yàn)結(jié)果都表明rolGLP-HV具有明顯的治療和預(yù)防糖尿病及血栓的雙重功能，有望研發(fā)成為治療糖尿病和心腦血管病的雙功能口服藥物。本研究為今后rolGLP-HV的臨床前應(yīng)用研究