microRNA-15b在腹膜間皮細胞轉分化中的作用與機制研究.pdf

1、目前終末期腎臟病(end-stage renal disease，ESRD)的一體化治療中，血液透析和腹膜透析是兩種重要的治療方式。相對于血液透析而言，腹膜透析具有保護殘余腎功能、提供持續(xù)超濾、利于患者血壓控制與液體平衡、中分子物質清除效果好、患者得以回歸社會等優(yōu)點。在腹膜透析過程中，各種急慢性原因所導致的腹膜病變可引起腹膜纖維化，并最終導致腹膜超濾失敗，這是患者退出腹膜透析的重要原因之一。其中，腹膜間皮細胞的上皮-間充質轉分化（epi

2、thelial-to-mesenchymal transition，EMT）在腹膜透析(peritoneal dialysis，PD)相關性腹膜纖維化中起關鍵作用，其主要表現(xiàn)為上皮細胞標志物如E-cadherin、ZO-1等表達降低，而間充質標志物如Vimentin、α-SMA等表達升高。研究顯示，miRNAs參與了多種細胞的EMT過程，進而調(diào)節(jié)器官或組織的纖維化，但其在腹膜間皮細胞轉分化中的扮演的角色及其可能的機制尚未完全明確，仍有待

3、進一步研究。因此，是否能通過調(diào)節(jié)miRNAs的表達，進而抑制腹膜間皮細胞EMT的發(fā)生是腹膜纖維化預防和治療的新方向。
　　目的：探討microRNA-15b對人腹膜間皮細胞向上皮間充質轉分化(EMT)的調(diào)節(jié)作用及可能的分子機制。
　　方法：1.進行預實驗，用不同濃度的高糖溶液刺激人腹膜間皮細胞株(HMrSV5)，篩選最佳的高糖刺激濃度及時間點。2.使用138mmol/L高糖溶液刺激HMrSV5細胞24h，觀察高糖溶液對HMr

4、SV5細胞microRNA-15b表達的影響。3.轉染microRNA-15b模擬物（microRNA-15b mimic）使HMrSV5中microRNA-15b過表達或轉染microRNA-15b抑制劑(microRNA-15b inhibitor)抑制HMrSV5中microRNA-15b的表達，再給予138mmol/L高糖溶液刺激24小時，采用實時熒光定量PCR、western印跡等方法，觀察過表達microRNA-15b或抑制

5、表達microRNA-15b對高糖誘導的HMrSV5細胞EMT相關蛋白和基因表達的影響。4.觀察調(diào)節(jié)microRNA-15b后，Smad通路蛋白的mRNA和蛋白表達的改變。
　　結果：1.根據(jù)細胞生物活性及蛋白表達情況選擇最佳刺激為138mmol/L高糖溶液，最佳時間為24h。2.138mmol/L高糖溶液的刺激，可使HMrSV5中microRNA-15b表達明顯升高(P＜0.05)。3.轉染microRNA-15b模擬物后高糖誘

6、導下的上皮標志物E-cadherin蛋白的表達明顯降低，并且高糖引起的間充質標志物Vimentin及纖維化標記Fibronectin(FN)mRNA和蛋白表達增加(P＜0.05);而轉染microRNA-15b抑制劑則結果相反。4.轉染microRNA-15b mimic可明顯抑制高糖誘導下腹膜間皮細胞的Smad7mRNA及蛋白水平的表達(P＜0.05)，而轉染microRNA-15b inhibitor可明顯增強高糖誘導下腹膜間皮細胞