ICAM-1單克隆抗體修飾辛伐他汀納米結(jié)構(gòu)脂質(zhì)載體的急性肺損傷靶向治療研究.pdf

1、急性肺損傷(acute lung injury，ALI)是一種臨床常見危重癥，迄今仍無有效治療手段。肺血管內(nèi)皮損傷是誘發(fā)ALI的重要原因。研究顯示他汀類藥物具有保護血管內(nèi)皮及抗炎的特性，對ALI起到潛在的改善作用。同時研究表明，高劑量他汀干預(yù)對其體內(nèi)抗炎作用具有重要意義，但同時也提高了藥物潛在的劑量依賴性副作用的發(fā)生風險。本論文以辛伐他?。╯imvastatin，SV）為模型藥物，構(gòu)建針對肺血管內(nèi)皮上細胞間粘附分子1（intercell

2、ular adhesion molecule1，ICAM-1）特異性靶向的ICAM-1單克隆抗體修飾辛伐他汀納米結(jié)構(gòu)脂質(zhì)載體(nanostructuredlipid carriers，NLCs)，通過促進藥物的病變肺部有效蓄積，在提高藥物療效的同時，降低藥物潛在的副作用。
　　采用單硬脂酸甘油酯為固態(tài)脂質(zhì)、中鏈脂肪酸甘油酯為液態(tài)脂質(zhì)、聚乙二醇單硬脂酸酯為兩親性脂質(zhì)材料，通過控制脂質(zhì)材料總濃度，以水性溶劑擴散法制備了不同粒徑的空白納

3、米結(jié)構(gòu)脂質(zhì)載體NLCs-1(1mg/mL)，NLCs-2(3mg/mL)和NLCs-3(9mg/mL)。制備得到的NLCs粒徑分別約43.3nm、85.3nm和198.3nm，隨著脂質(zhì)材料總濃度增加，NLCs粒徑增大。以Balb/c小鼠為模型動物，考察空白NLCs的體內(nèi)分布，結(jié)果表明大粒徑NLCs具有顯著的肺分布優(yōu)勢。
　　控制空白NLCs處方不變，加入質(zhì)量分數(shù)占處方含量5％的模型藥物辛伐他汀，通過控制脂質(zhì)材料與藥物總濃度，以水性

4、溶劑擴散法制備了不同粒徑的載藥納米結(jié)構(gòu)脂質(zhì)載體SV/NLCs-1（1mg/mL），SV/NLCs-2(3mg/mL)和SV/NLCs-3(9mg/mL)。制備得到的載藥NLCs粒徑分別約143.7nm、259.6nm和337.8nm。相比于空白NLCs，包載藥物后NLCs粒徑增大，同時其粒徑同樣隨著脂質(zhì)材料與藥物總濃度增加而增大。載藥NLCs的藥物包封率隨著脂質(zhì)材料和藥物總濃度增加，由66.70％提高至91.04％。體外釋放結(jié)果表明，N

5、LCs對藥物有緩釋作用，藥物可持續(xù)釋放36h以上，且釋放速率隨著粒徑增大而減緩。
　　以人血管內(nèi)皮細胞株（human vascular endothelial cell line，EAhy926）為模型細胞，考察空白NLCs和載藥NLCs的細胞毒性?？瞻譔LCs的細胞半數(shù)致死量(IC50)在400μg/mL以上，載藥NLCs的IC50在220μg/mL以上，IC50值均隨著粒徑增大而增大。載藥NLCs在模型細胞上的攝取具有時間依賴

6、性，且呈現(xiàn)良好的內(nèi)在化能力，攝取速率隨著粒徑增大而減慢。
　　合成單氨基終端的聚乙二醇單硬脂酸酯(NH2-PEG2000-SA)作為兩親性脂質(zhì)材料，部分替代NLCs原處方中的聚乙二醇單硬脂酸酯。采用水性溶劑擴散法，制備NH2-PEG2000-SA修飾的脂質(zhì)材料與藥物總濃度為9mg/mL的載藥NLCs(SV/NLCs-3)。以N，N'-琥珀酰亞胺基碳酸酯為鏈橋，制備ICAM-1單抗修飾的載藥納米結(jié)構(gòu)脂質(zhì)載體（anti-ICAM/SV

7、/NLCs）。Anti-ICAM/SV/NLCs粒徑約354.7nm，電位約-32.1mV，藥物包封率約96.78％，體外藥物釋放可持續(xù)36 h以上，與未經(jīng)抗體修飾的SV/NLCs-3相比理化性質(zhì)無明顯變化。以LPS活化的EAhy926為細胞模型考察納米粒定量攝取，結(jié)果表明細胞對anti-ICAM/SV/NLCs的攝取高于對照SV/NLCs-3;采用ICAM-1單抗阻斷細胞表面ICAM-1后，EAhy926對anti-ICAM/SV/N

8、LCs的攝取降低。采用Balb/c小鼠為模型動物，以暴露式氣管滴注脂多糖建立ALI小鼠模型，尾靜脈給藥考察納米粒的體內(nèi)分布結(jié)果表明，anti-ICAM/SV/NLCs在模型小鼠體內(nèi)的肺分布顯著高于未經(jīng)ICAM-1單抗修飾的SV/NLCs-3及anti-ICAM/SV/NLCs在正常小鼠體內(nèi)的肺分布。
　　采用Balb/c小鼠為模型動物，以暴露式氣管滴注脂多糖構(gòu)建ALI小鼠模型，通過尾靜脈注射給藥，考察游離辛伐他汀、SV/NLCs-

9、3和anti-ICAM/SV/NLCs對模型小鼠的體內(nèi)藥效。給藥48h后，anti-ICAM/SV/NLCs對小鼠肺內(nèi)TNF-α和IL-6炎性因子水平的抑制作用強于游離辛伐他汀和SV/NLCs-3;對于炎性細胞的肺內(nèi)浸潤，相比于其他藥物，anti-ICAM/SV/NLCs在給藥24h和48h后均表現(xiàn)出更強的抑制作用。HE染色觀察給藥24h后小鼠肺組織病理形態(tài)學，anti-ICAM/SV/NLCs較其他藥物更顯著的改善了模型小鼠肺內(nèi)炎性細