羥氯喹處理臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞治療小鼠狼瘡腎炎的作用及機(jī)制.pdf

1、目的:觀察羥氯喹聯(lián)合/預(yù)處理人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞治療小鼠狼瘡腎炎的療效，并初步探討其機(jī)制。
　　方法：1.在體療效觀察部分：采用C57BL/6小鼠作為正常對照組，將MRL/lpr小鼠隨機(jī)分為狼瘡腎炎模型（lupus nephritis,LN）組、麥考酚酸酯陽性對照（ mycophenolate mofetil， MMF）組、羥氯喹（hydroxychloroquine，HCQ）組、人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞（human umbilical

2、cord mesenchymal stem cells， MSC）組、HCQ與 MSC聯(lián)合干預(yù)（HCQ+MSC）組和HCQ誘導(dǎo)預(yù)處理MSC（HCQ-MSC）組，分別于第15周和第17周尾靜脈注射MSCs，在第15周至27周灌胃給予HCQ和MMF。
　　2.機(jī)制研究部分:MRL/lpr小鼠分為MSC對照（Ctrl-MSC）組和條件培養(yǎng)基（conditional culture medium，CM）組，分別于第17周和第23周尾靜脈注

3、射MSCs或條件培養(yǎng)基。
　　3.主要觀察指標(biāo)及方法：HE、PASM染色觀察小鼠腎臟病理組織變化；ELISA檢測血清中抗雙鏈DNA抗體水平；考馬斯亮藍(lán)檢測尿蛋白；小鼠淋巴結(jié)評分和脾臟指數(shù)測定；ELISA檢測 MSCs細(xì)胞上清TNF-α、MCP-1、IL-1β、TGF-β和CXCL10的水平，以及測定小鼠血清IFN-γ、IL-2、IL-10、IgM的含量；免疫組化觀察小鼠腎臟IFN-γ、CXCR3的表達(dá)情況；劃痕實(shí)驗(yàn)、Transwe

4、ll檢測MSCs細(xì)胞遷移能力；PCR測定預(yù)處理后的MSCs中IL-1βmRNA表達(dá)水平。
　　結(jié)果：與正常C57BL/6組小鼠相比，LN組小鼠腎小球腫大，腎間質(zhì)大量炎癥細(xì)胞浸潤，腎小管多處壞死，尿蛋白與抗雙鏈DNA抗體顯著升高（P<0.05），淋巴結(jié)腫大。與LN組相比，HCQ+MSC組小鼠腎臟損傷無顯著改善，腎間質(zhì)仍有大量細(xì)胞浸潤，尿蛋白持續(xù)升高直到27周才明顯下降，抗雙鏈DNA抗體在22周后明顯降低，但仍明顯高于MSC組和HCQ

5、組(P<0.05)；HCQ-MSC組腎臟損傷明顯改善，腎間質(zhì)炎癥細(xì)胞減少，腎小球基底膜無明顯增厚，腎小管無明顯壞死，腎臟組織CXCR3表達(dá)顯著下降，血清中IL-2明顯降低，IL-10明顯升高， IgM顯著下降，血清中抗雙鏈DNA抗體水平18周開始明顯下降,尿蛋白20周顯著降低（P<0.05）。體外實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，經(jīng)HCQ誘導(dǎo)的MSCs TNF-α和MCP-1分泌明顯下降，IL-1β和CXCL10分泌明顯增加，MSCs遷移能力增強(qiáng)。