大黃游離蒽醌對SAP大鼠腸淋巴系統(tǒng)免疫功能及腸道菌群的影響.pdf

1、目的:觀察大黃游離蒽醌對重癥急性胰腺炎(severe acute pancreatitis，SAP)大鼠腸淋巴系統(tǒng)特異性和非特異性免疫功能的影響，并探討腸道菌群變化與腸淋巴系統(tǒng)免疫功能間的相關性。
　　方法:(1)健康雄性SD大鼠18只，隨機分為:假手術(control，C)組、SAP模型(modle，M)組、大黃游離蒽醌干預(Free anthraquinone，F)組。造模24 h后采集大鼠腸系膜淋巴結(mesenteric

2、lymph nodes，MLN)和小腸組織進行石蠟包埋，另取部分MLN制備細胞懸液。光鏡下觀察MLN的HE染色病理組織學改變;免疫熒光法(Immunofluorescence，IF)測定MLN和小腸中核苷酸結合寡聚化結構域樣受體(nucleotide-binding oligomerization domain-likereceptors，NLRP3)與凋亡相關的斑點樣蛋白(apoptosis-associatedspeck-like

3、protein containing a CARD domain，ASC)的表達;免疫組織化學（Immuno histochemistry, IHC）測定MLN和小腸半胱氨酸天冬氨酸酶-1(Caspase-1)的表達及小腸中SIgA的表達。流式細胞術(Flowcytometry, FCM)測定MLN細胞懸液的Th1/Th2比值及Foxp3標記的Treg比例。(2)采用逆行胰膽管緩慢注射3.5％的無菌注射?；悄懰徕c制作大鼠SAP模型，健康

4、雄性SD大鼠18只，隨機分為:假手術(C)組、SAP模型(M)組、大黃游離蒽醌干預(F)組，造模后24 h，碘伏消毒肛門，EP管采集大鼠糞便，凍存于-80℃，超低溫冰袋運送至上海微基生物科技有限公司進行菌群分析。
　　結果:(1)所有大鼠的優(yōu)勢細菌一致，均是擬桿菌門(Bacteroidetes)、變形菌門(Proteobacteria)和厚壁菌門（Firmicutes）。C組中擬桿菌門和厚壁菌門占的相對豐度比較大;變形菌的相對豐度

5、比很少。與C組相比較，M組的菌群中厚壁菌門與擬桿菌門的相對豐度比明顯降低，而變形菌門的相對豐度比顯著升高。F組厚壁菌門與擬桿菌門的相對豐度比較M組有所提高，變形菌門的相對豐度比例有所降低。M組多樣性較C組顯著降低，F組菌群多樣性有所升高。(2)光鏡下觀察大鼠小腸及MLN組織病理學改變，M大鼠小腸粘膜上皮變性壞死，絨毛脫落嚴重，粘膜及粘膜下血管擴張、出血較多、炎性細胞浸潤;F組小腸病變明顯減輕，部分絨毛融合、缺損，固有層充血水腫，有少量炎

6、性細胞浸潤。M組較C組淋巴小結增大，皮質區(qū)增厚，皮質區(qū)淋巴小結數量增加;F組與M組相比較，皮質區(qū)淋巴小結數量少，體積小。IF檢測顯示，M組大鼠小腸及MLN的NLRP3和ASC的表達均上調;F組NLRP3和ASC的表達均有所下調。IHC法檢測顯示，M組大鼠小腸及MLN的Caspase-1表達明顯上調;F組Caspase-1表達有所下調。而M組SIgA的表達明顯下調;F組SIgA的表達有所上調。FCM檢測顯示，MLN中Th1的表達M組較C組

7、明顯上調(P＜0.05);F組較M組下調(P＜0.05)。Th2的表達M組較C組明顯下調(P＜0.05);F組較M組明上調（P＜0.05）。M組Th1/Th2比例較C組明顯上調(P＜0.05);F組較M組下調（P＜0.05）。M組的CD4+CD25+Foxp3+明顯高于C組(P＜0.05);F組與M組相比較顯著降低(P＜0.05)。M組的Treg比例明顯高于C組(P＜0.05);F組與M組相比較顯著降低(P＜0.05)。(3)腸道菌群變

8、化與腸淋巴系統(tǒng)免疫功能間的相關性分析表明:菌群多樣性分別與小腸及MLN中NLRP3、ASC、caspase-1、Th1、Treg表達呈顯著負相關(P＜0.01);與SIgA、Th2表達呈顯著正相關(P＜0.01)。變形菌門數量分別與小腸及MLN中NLRP3、ASC、caspase-1、Th1、Treg表達呈顯著正相關(P＜0.01);與SIgA、Th2表達呈顯著負相關(P＜0.01)。擬桿菌門和厚壁菌門與腸淋巴系統(tǒng)免疫應答間的相關性均不