酪氨酸磷酸酶Shp2在小鼠樹(shù)突狀細(xì)胞介導(dǎo)的過(guò)敏性哮喘中的作用研究.pdf

1、哮喘是一種慢性小氣道炎癥疾病，屬于Ⅰ型超敏反應(yīng)。哮喘的主要病理特征包括氣道高反應(yīng)性，以嗜酸性粒細(xì)胞浸潤(rùn)為主的炎癥、杯狀細(xì)胞化生及黏液過(guò)度分泌等。目前缺乏安全治愈哮喘的有效藥物，解析哮喘的發(fā)病機(jī)制及其調(diào)控過(guò)程對(duì)于哮喘新型診療方案制定具有重要意義。
　　樹(shù)突狀細(xì)胞(DC)是功能最強(qiáng)的抗原遞呈細(xì)胞，被視為連接固有免疫和適應(yīng)性免疫的橋梁。當(dāng)外界抗原進(jìn)入氣道時(shí)，首先由DC識(shí)別并將抗原吞噬加工處理，在加工處理的同時(shí)也會(huì)向附近的淋巴結(jié)遷移，DC

2、在遷移的過(guò)程中不斷成熟，在淋巴結(jié)中促使Naive T細(xì)胞分化為T(mén)h2型細(xì)胞，Th2型細(xì)胞進(jìn)一步激活B細(xì)胞使其產(chǎn)生大量IgE抗體吸附于肥大細(xì)胞表面，當(dāng)外界相同的抗原再次入侵機(jī)體，抗原與IgE抗體結(jié)合，引起肥大細(xì)胞活化，分泌大量活性介質(zhì)，導(dǎo)致氣道痙攣和氣道炎癥。
　　蛋白磷酸酶與激酶介導(dǎo)的可逆磷酸化調(diào)控是細(xì)胞信號(hào)傳遞中最廣泛、最普遍的調(diào)控方式。Shp2由PTPN11基因編碼，是一種廣泛表達(dá)的非受體型酪氨酸磷酸酶，參與了炎癥反應(yīng)、腫瘤的

3、發(fā)生和免疫調(diào)節(jié)等許多重要的病理生理過(guò)程。而對(duì)于哮喘的關(guān)鍵起始過(guò)程的調(diào)控并無(wú)報(bào)道。前期研究發(fā)現(xiàn)Shp2可以參與肺上皮損傷及肺部炎癥調(diào)控，這提示了Shp2在調(diào)控肺部損傷中的重要作用。目前關(guān)于Shp2對(duì)過(guò)敏性哮喘影響的研究主要集中在炎癥發(fā)生的后期，包括維持IL-5誘導(dǎo)的嗜酸性粒細(xì)胞的存活以及正向調(diào)控氣道上皮細(xì)胞TGF-β的產(chǎn)生從而影響哮喘后期的氣道重構(gòu)。最近的一項(xiàng)研究發(fā)現(xiàn)Shp2通過(guò)C型凝集素受體通路介導(dǎo)了DC抵抗白色念珠菌感染的過(guò)程。這提示

4、我們Shp2在DC介導(dǎo)的免疫反應(yīng)中具有重要作用。
　　本項(xiàng)研究中，我們首先構(gòu)建了DC特異性敲除Shp2的小鼠(Cd11c-CreShp2Fox/Flox)在無(wú)外界壓力情況下敲除組小鼠與對(duì)照組在肺組織結(jié)構(gòu)、白細(xì)胞分類(lèi)計(jì)數(shù)等方面沒(méi)有明顯差異。其次我們利用HDM及OVA分別誘導(dǎo)小鼠產(chǎn)生過(guò)敏性哮喘，結(jié)果顯示DC中缺失Shp2可以緩解由過(guò)敏原引起的哮喘。在哮喘的發(fā)病進(jìn)程中，DC的吞噬、成熟、遷移以及抗原遞呈都起到了非常重要的作用，因此我們對(duì)

5、DC的各項(xiàng)功能分別做了檢測(cè)。我們用OVA偶聯(lián)Alexa-Flour647的熒光染料與小鼠骨髓誘導(dǎo)分化的DC共孵育檢測(cè)其對(duì)抗原的吞噬能力，結(jié)果顯示Shp2缺失并不影響DC的吞噬。接著，我們對(duì)DC表面標(biāo)記Cd11c以及與其成熟相關(guān)的共刺激分子CD80、CD86進(jìn)行流式檢測(cè)。檢測(cè)發(fā)現(xiàn)Shp2缺失對(duì)于DC共刺激分子CD80、CD86的表達(dá)量沒(méi)有影響。下一步我們利用Transwell小室對(duì)DC的遷移進(jìn)行了檢測(cè)，結(jié)果發(fā)現(xiàn)Shp2缺失可以明顯抑制DC