14-3-3β蛋白介導(dǎo)肝臟GCGR對(duì)糖異生的調(diào)節(jié)作用.pdf

1、目的：
　　胰高血糖素（Glucagon,GLN）與肝臟胰高血糖素受體（Glucagon receptor,GCGR）結(jié)合后，參與調(diào)節(jié)機(jī)體糖脂代謝作用。研究發(fā)現(xiàn)14-3-3β蛋白(YWHAB)是GCGR的相關(guān)輔助蛋白。目前關(guān)于肝臟脂肪變后這兩種蛋白表達(dá)變化情況以及兩者結(jié)合后對(duì)肝臟糖代謝的具體調(diào)節(jié)作用還不是很明確。本研究旨在觀察GCGR和YWHAB在肝臟脂肪變后的表達(dá)水平變化以及YWHAB介導(dǎo)GCGR對(duì)肝臟糖異生的調(diào)節(jié)作用。

2、　　方法：
　　應(yīng)用QPCR、Western Blot檢測(cè)HepG2細(xì)胞株、小鼠多種組織、HepG2細(xì)胞脂肪變后和ob/ob小鼠肝組織的gcgr和ywhab mRNA、蛋白的表達(dá)情況。免疫組化技術(shù)（immunocytochemistry）檢測(cè)ob/ob小鼠和對(duì)照小鼠肝組織中兩者表達(dá)及定位情況。免疫共沉淀法檢測(cè)YWHAB和GCGR在HepG2細(xì)胞中結(jié)合情況。過(guò)表達(dá)及沉默YWHAB后，在有和無(wú)胰高血糖素刺激下，用QPCR、Wester

3、n Blot檢測(cè)糖異生主要關(guān)鍵酶葡萄糖-6-磷酸酶(glucose-6-phosphatase，G6Pase)和磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶（phosphoenolpyruvate carboxykinase，PEPCK）mRNA和蛋白表達(dá)水平變化。
　　結(jié)果:
　　1. GCGR和YWHAB在肝組織和HepG2細(xì)胞均有表達(dá)；免疫組化結(jié)果顯示：GCGR在細(xì)胞膜上表達(dá)，YWHAB在細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞核中表達(dá)。
　　2.在mRNA和蛋

4、白水平上，ob/ob小鼠肝組織及油酸誘導(dǎo)HepG2細(xì)胞脂肪變中GCGR和YWHAB的表達(dá)量均比對(duì)照組有所降低。
　　3. YWHAB和GCGR在HepG2細(xì)胞中結(jié)合后，在胰高血糖素的刺激下，YWHAB過(guò)表達(dá)組中的G6Pase、PEPCK mRNA、蛋白的表達(dá)顯著下降；YWHAB沉默表達(dá)組中G6Pase、PEPCK表達(dá)量增加。
　　總結(jié):
　　GCGR和YWHAB在肝臟和HepG2細(xì)胞中均有表達(dá)。肝臟發(fā)生脂肪變后，兩者表