頭孢妥侖膽汁排泄的分子機(jī)制及其對(duì)肝臟轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白調(diào)節(jié)作用的研究.pdf

1、目的：藥物轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白在藥物體內(nèi)代謝過(guò)程中的重要作用及研究?jī)r(jià)值越來(lái)越多地受到研究者的關(guān)注。Mrp2，Bcrp是位于肝細(xì)胞膽管側(cè)膜上的ABC族轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白，可轉(zhuǎn)運(yùn)許多內(nèi)源性物質(zhì)和外源性物質(zhì)（如藥物），許多藥物也可調(diào)節(jié)轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白的表達(dá)。頭孢妥侖是第四代頭孢菌素類抗生素，研究介導(dǎo)其膽汁排泄的肝臟藥物轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白，對(duì)預(yù)測(cè)與頭孢妥侖相關(guān)的藥物間相互作用及了解β-內(nèi)酰胺類抗生素的膽汁排泄機(jī)制有重要意義；了解藥物對(duì)藥物轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白表達(dá)情況的影響能夠使我們更清楚地從轉(zhuǎn)運(yùn)

2、蛋白分子水平理解藥物的體內(nèi)動(dòng)力學(xué)變化，從而為臨床合理用藥提供理論依據(jù)和指導(dǎo)。本實(shí)驗(yàn)通過(guò)in situ和in vivo方法研究參與頭孢妥侖膽汁排泄過(guò)程的藥物轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白及頭孢妥侖口服給藥后對(duì)肝臟主要轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白表達(dá)的影響。 方法：采用肝灌流實(shí)驗(yàn)方法，研究頭孢妥侖是否經(jīng)Mrp2、Bcrp或P-gp的轉(zhuǎn)運(yùn)；采用RT-PCR和Western blot實(shí)驗(yàn)，考察頭孢妥侖對(duì)肝臟主要轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白表達(dá)的影響： （1）肝灌流實(shí)驗(yàn)，設(shè)立對(duì)照組（頭孢妥侖

3、（1μM））和實(shí)驗(yàn)組（頭孢妥侖（1μM）和丙磺舒（Mrp2抑制劑）、新生霉素（Bcrp抑制劑）或維拉帕米（P-gp抑制劑）（20μM）），灌流Wistar大鼠肝臟，在設(shè)定時(shí)間點(diǎn)收集出口灌流液和膽汁樣品，高效液相色譜法測(cè)定樣品中頭孢妥侖含量，考察實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組中肝攝取率和膽汁累積排泄率的差別。 （2）大鼠灌胃給藥，設(shè)立對(duì)照組（生理鹽水）和頭孢妥侖16mg/kg，50mg/kg，100mg/kg三個(gè)不同的劑量組，每天兩次，一周后，取

4、肝臟，提取總RNA，進(jìn)行RT-PCR反應(yīng)，檢測(cè)Mrp2，Bcrp，P-gp，Oct1和Oat2的mRNA的表達(dá)變化；（3）采用超速離心法提取膜蛋白Mrp2，運(yùn)用Western blot方法測(cè)定不同劑量組中Mrp2蛋白表達(dá)的變化，考察其變化是否有劑量依賴性。 結(jié)果： （1）肝灌流實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組相比，肝攝取率變化無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義上的差別；在丙磺舒抑制劑組，肝臟灌流25分鐘后，大鼠的頭孢妥侖膽汁累積排泄率降低至對(duì)照組

5、的43．78%；新生霉素組的膽汁累積排泄率降至對(duì)照組的79．52%；維拉帕米做P-gp抑制劑時(shí)，頭孢妥侖的膽汁累積排泄率與對(duì)照組相比，無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義上的差別。 （2）大鼠灌胃給予頭孢妥侖一周后，Mrp2，Bcrp和Oat2 mRNA的表達(dá)增多，且100mg/kg劑量組mRNA表達(dá)明顯多于16mg/kg劑量組；P-gp和Oct1的mRNA表達(dá)減少，與頭孢妥侖劑量的增加呈反向變化。（3）Western blot與RT-PCR結(jié)果一致，

6、Mrp2蛋白表達(dá)增多，且100mg/kg劑量組中Mrp2蛋白表達(dá)是對(duì)照組的1．7倍，16mg/kg劑量組中Mrp2蛋白表達(dá)是對(duì)照組的1．32倍。 結(jié)論： （1）Mrp2在頭孢妥侖的膽汁排泄過(guò)程中起主要作用，Bcrp也參與其膽汁排泄過(guò)程，而P-gp不介導(dǎo)頭孢妥侖的膽汁排泄。 （2）頭孢妥侖可增加Mrp2，Bcrp和Oat2的mRNA表達(dá)，減少P-gp和Oct1的mRNA表達(dá)，且這種調(diào)節(jié)作用有劑量依賴性。 （