泛素蛋白酶體系統(tǒng)在氧化低密度脂蛋白誘導(dǎo)人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞損傷中的作用及其與自噬間的關(guān)系研究.pdf

1、目的:
　　觀察泛素蛋白酶體系統(tǒng)在氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)誘導(dǎo)人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞(HUVECs)損傷中的作用，探討其初步機(jī)制，并研究其與自噬及凋亡之間的關(guān)系。
　　方法:
　　1.運(yùn)用不同濃度及時(shí)間點(diǎn)的ox-LDL處理HUVECs，采用免疫印跡技術(shù)檢測(cè)泛素、及E1泛素激活酶、E2泛素結(jié)合酶、E3泛素連接酶的表達(dá)，觀察ox-LDL對(duì)HUVECs泛素蛋白酶體水平的影響。2.在自噬抑制劑3-甲基腺嘌呤（3-MA）及泛素

2、蛋白酶體抑制劑MG-132的干預(yù)下，采用免疫印跡技術(shù)檢測(cè)泛素、自噬標(biāo)記蛋白LC3Ⅱ/LC3Ⅰ的表達(dá)變化，觀察在ox-LDL損傷HUVECs過(guò)程中泛素蛋白酶體途徑與自噬之間的關(guān)系。3.運(yùn)用不同濃度及時(shí)間點(diǎn)的ox-LDL處理HUVECs，采用免疫印跡技術(shù)檢測(cè)溶酶體酶(cathepsin B、cathepsin D)的表達(dá)，觀察ox-LDL對(duì)HUVECs溶酶體酶水平的影響。4.在泛素蛋白酶體抑制劑MG-132的干預(yù)下，采用免疫印跡技術(shù)檢測(cè)溶酶

3、體酶（cathepsin B、cathepsin D）的表達(dá)變化，進(jìn)一步探討ox-LDL損傷HUVECs過(guò)程中泛素蛋白酶體途徑與自噬、凋亡之間的關(guān)系。
　　結(jié)果:
　　1.ox-LDL作用能上調(diào)HUVECs的泛素蛋白(Ubiquitin)表達(dá)，并呈劑量依賴(lài)性。免疫印跡技術(shù)結(jié)果顯示，ox-LDL(100μg/ml)上調(diào)HUVECs中Ubiquitin表達(dá)的作用在12h和24h出現(xiàn)兩個(gè)高峰。ox-LDL(100μg/ml)作用1

4、2h和24h也能顯著上調(diào)HUVECs中E1、E2、E3酶的表達(dá);2.3-MA能抑制ox-LDL引起的LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ表達(dá)上調(diào)，同時(shí)對(duì)HUVECs Ubiquitin的表達(dá)無(wú)明顯影響。MG-132在抑制ox-LDL上調(diào)Ubiquitin的同時(shí)能上調(diào)HUVECs LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ的表達(dá)。3.ox-LDL作用12h能被HUVECs大量吞噬，并促進(jìn)HUVECs增殖，該作用能被3-MA及MG-132明顯抑制。4.ox-LDL(100μ

5、g/ml)作用能上調(diào)HUVECs中cathepsin B和cathepsin D表達(dá)，此作用在24小時(shí)達(dá)到高峰。5.MG-132可抑制ox-LDL介導(dǎo)的cathepsin B和cathepsin D的表達(dá)上調(diào)。
　　結(jié)論:
　　ox-LDL能促進(jìn)HUVECs增殖，并誘導(dǎo)其發(fā)生自噬和壞死。ox-LDL對(duì)HUVECs的損傷與其被細(xì)胞吞噬后的降解障礙有關(guān)，亦能誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡，其可通過(guò)泛素蛋白酶體及自噬兩條途徑降解，泛素蛋白酶體為首要