雞三種免疫抑制病基因芯片檢測(cè)方法的建立.pdf

1、近年來(lái)，禽類(lèi)免疫抑制病在我國(guó)養(yǎng)禽業(yè)中迅速蔓延，嚴(yán)重地威脅著養(yǎng)禽業(yè)的健康發(fā)展，禽類(lèi)免疫抑制病在臨床上主要依靠疫苗和藥物來(lái)防控和治療；但其中一些疫病迄今為止仍無(wú)有效的疫苗和藥物，此類(lèi)疫病在臨床上主要通過(guò)對(duì)病原進(jìn)行檢測(cè)，從而達(dá)到凈化和防控的目的。本研究基于多重 PCR技術(shù)，建立了雞傳染性貧血病、禽網(wǎng)狀內(nèi)皮組織增殖病和區(qū)分禽白血病A、C、D亞群的基因芯片檢測(cè)方法。
　　根據(jù)NCBI收錄的雞傳染性貧血病毒、禽網(wǎng)狀內(nèi)皮增生癥病毒與禽白血病病毒

2、A、C、D亞群參考毒株的序列，設(shè)計(jì)合成3對(duì)特異性擴(kuò)增引物，將下游引物進(jìn)行Cy3熒光標(biāo)記，建立多重PCR體系；并參考目的序列內(nèi)保守區(qū)域，設(shè)計(jì)合成10條寡核苷酸探針，按照矩陣設(shè)計(jì)，點(diǎn)制在醛基化玻璃基片上，制作寡核苷酸探針基因檢測(cè)芯片；提取病毒核酸，進(jìn)行多重PCR擴(kuò)增后與探針進(jìn)行雜交，然后用熒光檢測(cè)儀掃描并分析結(jié)果。
　　經(jīng)雜交反應(yīng)后，芯片能夠同時(shí)檢測(cè)雞傳染性貧血病病毒和禽網(wǎng)狀內(nèi)皮增殖病病毒，并能區(qū)分禽白血病病毒 A、C、D亞群，其靈敏

3、度能夠到達(dá)107copies/mL，并且具有較高的特異性?；蛐酒瑢?duì)450份臨床樣品檢測(cè)的結(jié)果與 ELISA抗體檢測(cè)結(jié)果相比符合率高。本研究結(jié)果證明，基因芯片技術(shù)是一種有效地檢測(cè)雞傳染性貧血病毒和禽網(wǎng)狀內(nèi)皮增殖病病毒，并能區(qū)分禽白血病病毒A、C、D亞群的方法，為今后在臨床應(yīng)用中快速鑒別診斷雞傳染性貧血病病毒、禽網(wǎng)狀內(nèi)皮增生癥病病毒與禽白血病病毒 A、C、D亞群提供可行性。
　　通過(guò)本研究方法建立了禽白血病基因芯片，對(duì)同一只雞的全血