Wnt1通過(guò)上SRA和NF-kB參與LPS誘導(dǎo)的炎癥反應(yīng).pdf

1、研究背景:
　　機(jī)體受到細(xì)菌感染時(shí)，細(xì)菌釋放的LPS（脂多糖）成分可以激發(fā)機(jī)體的免疫炎癥反應(yīng)。由LPS激發(fā)的炎癥反應(yīng)涉及了多種炎癥信號(hào)通路（包括MAPK，NF-KB等）的激活。在這其中LPS通過(guò)結(jié)合于細(xì)胞膜表面的toll樣受體（主要是TLR4）和清道夫受體A類（SRA）激活下游信號(hào)分子myd88進(jìn)而使p65（NF-KB通路主要轉(zhuǎn)錄因子）入核增多，p65入核后增強(qiáng)了TNF-α，IL-6，iNOS的轉(zhuǎn)錄，使炎癥信號(hào)進(jìn)一步擴(kuò)大。

2、　　Wnt通路分為1.經(jīng)典wnt通路2.非經(jīng)典wnt通路3.鈣離子依賴型通路，屬于一類生物體內(nèi)較為保守的信號(hào)通路，主要參與了胚胎發(fā)育，細(xì)胞增殖，癌癥發(fā)生等。Wnt1分子屬于wnt經(jīng)典通路的一員。Wnt1由細(xì)胞合成并分泌到胞外后，通過(guò)結(jié)合于細(xì)胞膜表面的FZD1，LRP5，LRP6所形成的復(fù)合物受體激活了細(xì)胞質(zhì)內(nèi)β-catenin分子，使β-catenin分子入核后促進(jìn)TCF1/TCF4轉(zhuǎn)錄因子激活，增強(qiáng)對(duì)相關(guān)基因的轉(zhuǎn)錄。
　　以往研

3、究發(fā)現(xiàn)，在PC12細(xì)胞（大鼠腎上腺嗜鉻細(xì)胞瘤細(xì)胞）內(nèi)wnt1通過(guò)促進(jìn)NF-KB激活抑制了細(xì)胞凋亡。但是，wnt通路是否也參與了LPS引起的炎癥反應(yīng)還不甚明了。
　　目的:
　　關(guān)于LPS如何通過(guò)調(diào)節(jié)SRA以及wnt1激活下游NF-kB的機(jī)制還不甚明了。本研究旨在探究wnt1在LPS誘導(dǎo)的炎癥反應(yīng)中的作用，并分析wnt1、SRA和NF-kB三者之間的關(guān)系。
　　方法:
　　1)對(duì)于THP1細(xì)胞給予PMA激活使其分化

4、為巨噬細(xì)胞后作為所有后續(xù)實(shí)驗(yàn)用的細(xì)胞。用LPS處理后， Western blot檢測(cè)細(xì)胞中Wnt1蛋白含量的變化。
　　2)對(duì)THP1細(xì)胞轉(zhuǎn)染W(wǎng)nt1 siRNA，或Wnt1過(guò)表達(dá)質(zhì)粒后，用Western blot檢測(cè)細(xì)胞中NF-KB蛋白表達(dá)量的變化，用ELISA和WB檢測(cè)細(xì)胞中炎癥因子IL-6，TNF-α，iNOS的分泌量。
　　3)將THP1細(xì)胞分別轉(zhuǎn)染W(wǎng)nt1 siRNA或Wnt1過(guò)表達(dá)質(zhì)粒，檢測(cè)處理后的細(xì)胞中SRA受

5、體和TLR4受體的表達(dá)情況。對(duì)于Wnt1過(guò)表達(dá)的THP1細(xì)胞而言，給予SRAsiRNA轉(zhuǎn)染后，檢測(cè)細(xì)胞中細(xì)胞中的NF-KB蛋白表達(dá)量。
　　4)經(jīng)過(guò)LPS處理的THP1細(xì)胞轉(zhuǎn)染FZD1siRNA或加入VAX939(β-catenin抑制劑)后，檢測(cè)SRA受體蛋白表達(dá)量。
　　結(jié)果:
　　1)對(duì)于THP1細(xì)胞給予PMA和LPS處理后，細(xì)胞中Wnt1蛋白表達(dá)上升。
　　2)對(duì)THP1細(xì)胞轉(zhuǎn)染W(wǎng)nt1 siRNA，引起

6、NF-kB表達(dá)下降和炎癥因子IL-6，TNF-α，iNOS的分泌減少;轉(zhuǎn)染W(wǎng)nt1過(guò)表達(dá)質(zhì)粒后，THP1細(xì)胞中的NF-kB表達(dá)量和炎癥因子IL-6，TNF-α， iNOS的分泌量均上升。
　　3)對(duì)THP1細(xì)胞轉(zhuǎn)染W(wǎng)nt1 siRNA，引起細(xì)胞中SRA受體表達(dá)下降;給予Wnt1過(guò)表質(zhì)粒轉(zhuǎn)染后，SRA表達(dá)上升。
　　4)在LPS處理之前的THP1細(xì)胞先轉(zhuǎn)染FZD1siRNA或加入VAX939(β-catenin抑制劑)， SR