Wnt1通過上SRA和NF-kB參與LPS誘導的炎癥反應.pdf

1、研究背景:
　　機體受到細菌感染時，細菌釋放的LPS（脂多糖）成分可以激發(fā)機體的免疫炎癥反應。由LPS激發(fā)的炎癥反應涉及了多種炎癥信號通路（包括MAPK，NF-KB等）的激活。在這其中LPS通過結(jié)合于細胞膜表面的toll樣受體（主要是TLR4）和清道夫受體A類（SRA）激活下游信號分子myd88進而使p65（NF-KB通路主要轉(zhuǎn)錄因子）入核增多，p65入核后增強了TNF-α，IL-6，iNOS的轉(zhuǎn)錄，使炎癥信號進一步擴大。

2、　　Wnt通路分為1.經(jīng)典wnt通路2.非經(jīng)典wnt通路3.鈣離子依賴型通路，屬于一類生物體內(nèi)較為保守的信號通路，主要參與了胚胎發(fā)育，細胞增殖，癌癥發(fā)生等。Wnt1分子屬于wnt經(jīng)典通路的一員。Wnt1由細胞合成并分泌到胞外后，通過結(jié)合于細胞膜表面的FZD1，LRP5，LRP6所形成的復合物受體激活了細胞質(zhì)內(nèi)β-catenin分子，使β-catenin分子入核后促進TCF1/TCF4轉(zhuǎn)錄因子激活，增強對相關基因的轉(zhuǎn)錄。
　　以往研

3、究發(fā)現(xiàn)，在PC12細胞（大鼠腎上腺嗜鉻細胞瘤細胞）內(nèi)wnt1通過促進NF-KB激活抑制了細胞凋亡。但是，wnt通路是否也參與了LPS引起的炎癥反應還不甚明了。
　　目的:
　　關于LPS如何通過調(diào)節(jié)SRA以及wnt1激活下游NF-kB的機制還不甚明了。本研究旨在探究wnt1在LPS誘導的炎癥反應中的作用，并分析wnt1、SRA和NF-kB三者之間的關系。
　　方法:
　　1)對于THP1細胞給予PMA激活使其分化

4、為巨噬細胞后作為所有后續(xù)實驗用的細胞。用LPS處理后， Western blot檢測細胞中Wnt1蛋白含量的變化。
　　2)對THP1細胞轉(zhuǎn)染W(wǎng)nt1 siRNA，或Wnt1過表達質(zhì)粒后，用Western blot檢測細胞中NF-KB蛋白表達量的變化，用ELISA和WB檢測細胞中炎癥因子IL-6，TNF-α，iNOS的分泌量。
　　3)將THP1細胞分別轉(zhuǎn)染W(wǎng)nt1 siRNA或Wnt1過表達質(zhì)粒，檢測處理后的細胞中SRA受

5、體和TLR4受體的表達情況。對于Wnt1過表達的THP1細胞而言，給予SRAsiRNA轉(zhuǎn)染后，檢測細胞中細胞中的NF-KB蛋白表達量。
　　4)經(jīng)過LPS處理的THP1細胞轉(zhuǎn)染FZD1siRNA或加入VAX939(β-catenin抑制劑)后，檢測SRA受體蛋白表達量。
　　結(jié)果:
　　1)對于THP1細胞給予PMA和LPS處理后，細胞中Wnt1蛋白表達上升。
　　2)對THP1細胞轉(zhuǎn)染W(wǎng)nt1 siRNA，引起

6、NF-kB表達下降和炎癥因子IL-6，TNF-α，iNOS的分泌減少;轉(zhuǎn)染W(wǎng)nt1過表達質(zhì)粒后，THP1細胞中的NF-kB表達量和炎癥因子IL-6，TNF-α， iNOS的分泌量均上升。
　　3)對THP1細胞轉(zhuǎn)染W(wǎng)nt1 siRNA，引起細胞中SRA受體表達下降;給予Wnt1過表質(zhì)粒轉(zhuǎn)染后，SRA表達上升。
　　4)在LPS處理之前的THP1細胞先轉(zhuǎn)染FZD1siRNA或加入VAX939(β-catenin抑制劑)， SR