木霉屬纖維素酶基因在畢赤酵母表達(dá)及在統(tǒng)合工藝中應(yīng)用.pdf

1、甘蔗是我國重要經(jīng)濟(jì)植物，將甘蔗渣轉(zhuǎn)化為能源是緩解能源危機(jī)有效途徑之一。本文建立以三種重組畢赤酵母為基礎(chǔ)的統(tǒng)合生物工藝（consolidated bioprocessing。CBP)。
　　選取里氏木霉eg3、綠色木霉cbh2和bgl1基因，分別與表達(dá)載體pGAPZαA連接，整合到畢赤酵母基因組，構(gòu)建三株重組酵母。重組蛋白EG3、CBH2和BGL1酶活分別在72 h、96 h和168 h達(dá)到最高值0.82 U/mL、0.05 U/m

2、L和5.91 U/mL，研究重組酶活最適溫度、pH和金屬離子影響。
　　對(duì)甘蔗渣進(jìn)行堿預(yù)處理優(yōu)化，確定優(yōu)化條件為堿濃度4％（w/v）NaOH、37℃、處理48 h、200目甘蔗渣、固液比1:10。優(yōu)化前后堿處理產(chǎn)生總酚濃度由高于0.84 mg/mL降為0.47 mg/mL。
　　用酸對(duì)堿預(yù)處理樣品中和再生，用X射線衍射（X-ray diffraction，XRD）測算樣品結(jié)晶度系數(shù)（crystallinity index。C

3、rI），原材料CrI為51.59%，無機(jī)酸再生樣品CrI均下降，其中硫酸再生CrI最低為39.12%。有機(jī)酸再生樣品CrI反而升高。用掃描電鏡（scanning electron microscope，SEM）觀察，無機(jī)酸再生樣品結(jié)構(gòu)變得松散和雜亂無章，更有利纖維素酶接觸和水解。
　　對(duì)發(fā)酵體系進(jìn)行優(yōu)化，最適溫度30℃，三種重組酵母接種比1:3:3（P. pastoris-eg3、:P.pastoris-cbh2:P.pastor