1、金黃色葡萄球菌耐消毒劑基因qacA-B流行病研究;2、直接分子克隆法構(gòu)建重組缺陷型腺病毒AdHu5-mfsp27基因及擴(kuò)增與純化.pdf

1、第一部分金黃色葡萄球菌耐消毒劑基因qacA/B分子流行病學(xué)研究
　　 目的:通過檢測我院2007年1月到2009年6月臨床分離的金黃色葡萄qacA/B基因,分析qacA/B在我院的流行情況,有利于指導(dǎo)臨床合理使用消毒劑。
　　 方法:用PCR法檢測mecA基因和qacA/B基因陽性率。以PFGE分型、spa分型、SCCmec分型及抗菌藥物耐藥譜表型分型對攜帶有qacA/B基因菌株進(jìn)行同源性分析,結(jié)合臨床病歷資料,了解qa

2、cA/B在我院的分子流行病學(xué)特征。
　　 結(jié)果:qacA/B基因的檢出率為9.1％(12/176),mecA基因的檢出率為46.6%(82/176),MRSA中qacA/B攜帶率14.6%(12/82)顯著高于MSSA攜帶率(4/94),且差別具有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)。Spa分型將16株SA分為8型,以t037和t042為主。PFGE分型將細(xì)菌分為A-G型,其中以A1、B、G分別屬于同一克隆。12株攜帶有qacA/B金黃色

3、葡萄球菌SCCmec基因分型為SCCmecⅢ型。
　　 結(jié)論:菌株的流行主要在外科病房。攜帶有qacA/B金黃色葡萄球菌在神經(jīng)外科ICU出現(xiàn)有一個流行克隆,其spa分型為t037。盡管其他病區(qū)qacA/B分布率低,但在MRSA流行率高的現(xiàn)狀下,對其進(jìn)行流行病學(xué)檢測仍然具有重要意義。
　　 第二部分直接分子克隆法構(gòu)建重組缺陷型腺病毒AdHu5-mfsp27基因及其擴(kuò)增與純化
　　 mfsp27基因?qū)兕惣?xì)胞死亡誘導(dǎo)D

4、NA片段化因子α效應(yīng)蛋白家族,研究發(fā)現(xiàn)該基因可能為甘油三酯代謝途徑中的一個重要基因,與非酒精性肝病的發(fā)病有密切關(guān)系。將該基因高效導(dǎo)入細(xì)胞或動物體內(nèi)是詳細(xì)研究該基因功能的前提。
　　 目的:構(gòu)建重組腺病毒非酒精性脂肪肝發(fā)病相關(guān)基因AdHu5-040-fsp27(cds)高效高質(zhì)量擴(kuò)增和純化重組腺病毒以滿足體內(nèi)外實驗以及臨床試驗的需求。
　　 方法:直接分子克隆法構(gòu)建重組腺病毒,目標(biāo)基因首先克隆到穿梭質(zhì)粒,并位于兩個稀有限制

5、性內(nèi)切酶(I-ceuI and PI-sceI)后回收酶切片段后連接,然后線性化該重組腺病毒以釋放腺病毒載體基因組的反向末端重復(fù)序列(ITRs),利用磷酸鈣轉(zhuǎn)染重組質(zhì)粒,HEK293細(xì)胞包裝,感染擴(kuò)增大量制備體內(nèi)外實驗所需重組腺病毒。氯化銫梯度離心純化病毒并測定病毒的滴度。重組病毒MOI的測定。
　　 結(jié)果:成功構(gòu)建pAdHu5-mfsp27(cds)。AdHu5-mfsp27經(jīng)擴(kuò)增后的滴度(O.D.)為1×1013VP/mL;

6、MOI為1.44×1011,二者比值為69.44。重組腺病毒AdHu5-mfsp27可有效感染293包裝細(xì)胞,提示該重組腺病毒具有潛在的臨床應(yīng)用價值。
　　 結(jié)論:本實驗利用直接分子克隆方法構(gòu)建重組腺病毒AdHu5-mfsp27(cds)并高質(zhì)量擴(kuò)增,解決了用同源重組的方法構(gòu)建時難于挑選克隆,時間長成功率低的問題;利用高效液相柱,生物膠聯(lián)合氯化銫梯度離心技術(shù)純化病毒,簡化操作不需透析病毒,最大程度保存病毒活性,純度高,為下一步進(jìn)