D4多肽脂質體與腦內(nèi)小膠質細胞相互作用的研究.pdf

1、小膠質細胞是大腦的免疫細胞，在大腦的免疫應答中起著重要的作用。小膠質細胞是在胚胎發(fā)育初期由外周血中的巨噬細胞遷移進入腦組織，在腦組織中分化形成的。作為腦內(nèi)的免疫細胞，其表面有很多受體表達，可以結合多種類型的分子結構。
　　D4是本實驗室利用計算機輔助藥物設計的方法，針對腫瘤細胞表皮生長因子（epidermal growth factor receptor，EGFR）篩選出來的含有6個氨基酸的多肽配體。將含D4多肽修飾的熒光脂質體通

2、過尾靜脈注射到荷瘤小鼠體內(nèi)，小動物活體成像發(fā)現(xiàn)熒光多肽脂質體不僅在腫瘤內(nèi)有聚集，在腦內(nèi)也有較強的熒光信號。此外，在前期實驗中，我們還用洛哌丁胺分子作為“探針”，DSPE-PEG2000-D4形成的膠束為載體，通過小鼠熱水溫浴縮尾和福爾馬林致痛等藥效學實驗，從另一角度提示了D4多肽具有靶向載藥膠束跨越血腦屏障的能力。
　　基于前期的實驗結果，以及小膠質細胞在血腦屏障中的結構和功能特性，我們提出了D4多肽可能是通過與腦內(nèi)小膠質細胞作用

3、的假設。在本論文研究中，首先我們以EPC/HSPC,Chol和DSPE-PEG2000，F(xiàn)ITC-DHPE/Dii為材料，制備了不同處方的空白熒光脂質體和D4多肽修飾的靶向熒光脂質體，利用差速震蕩法在大鼠乳鼠中分離得到原代小膠質細胞，與熒光脂質體共同孵育后，用流式細胞儀和共聚焦顯微鏡觀察空白與靶向熒光脂質體與小膠質細胞的體外結合情況，結果表明，HSPC脂質體在含有2％D4多肽時與小膠質細胞和星型膠質細胞都有較好的結合；熒光共聚焦顯微鏡觀

4、察結果顯示，靶向脂質體的結合明顯優(yōu)于非靶向脂質體，并且靶向脂質體與小膠質細胞在0.5 h時就有很好的結合，與星型膠質細胞在4h時有較好的結合，而與少突膠質細胞的結合不明顯。
　　接著我們進一步考察了D4脂質體與小膠質細胞在體內(nèi)的結合情況。尾靜脈注射3h后，利用磁珠分選方法分離出大腦中的小膠質細胞，流式細胞儀檢測熒光脂質體與小膠質細胞在體內(nèi)的結合強弱，結果表明，D4多肽修飾的脂質體與小膠質細胞的結合與空白脂質體與小膠質細胞的結合有顯

5、著性差異。同時，為了進一步觀察熒光脂質體在腦組織中的分布，我們用免疫組化的方法，尾靜脈注射熒光脂質體后2 h,4 h和10 h取出完整腦組織，冰凍切片，CD68標記小膠質細胞，DAPI染細胞核后，共聚焦顯微鏡下觀察結果顯示，4 h時D4多肽脂質體開始靠近小膠質細胞，10 h時，D4多肽修飾的熒光脂質體與小膠質細胞完全結合，而非靶向脂質體與小膠質細胞沒有結合。
　　最后，本論文還考察了D4多肽修飾的阿霉素脂質體在腦原位瘤中的藥效學。