D4多肽脂質(zhì)體與腦內(nèi)小膠質(zhì)細(xì)胞相互作用的研究.pdf

1、小膠質(zhì)細(xì)胞是大腦的免疫細(xì)胞，在大腦的免疫應(yīng)答中起著重要的作用。小膠質(zhì)細(xì)胞是在胚胎發(fā)育初期由外周血中的巨噬細(xì)胞遷移進(jìn)入腦組織，在腦組織中分化形成的。作為腦內(nèi)的免疫細(xì)胞，其表面有很多受體表達(dá)，可以結(jié)合多種類型的分子結(jié)構(gòu)。
　　D4是本實(shí)驗(yàn)室利用計(jì)算機(jī)輔助藥物設(shè)計(jì)的方法，針對(duì)腫瘤細(xì)胞表皮生長(zhǎng)因子（epidermal growth factor receptor，EGFR）篩選出來(lái)的含有6個(gè)氨基酸的多肽配體。將含D4多肽修飾的熒光脂質(zhì)體通

2、過(guò)尾靜脈注射到荷瘤小鼠體內(nèi)，小動(dòng)物活體成像發(fā)現(xiàn)熒光多肽脂質(zhì)體不僅在腫瘤內(nèi)有聚集，在腦內(nèi)也有較強(qiáng)的熒光信號(hào)。此外，在前期實(shí)驗(yàn)中，我們還用洛哌丁胺分子作為“探針”，DSPE-PEG2000-D4形成的膠束為載體，通過(guò)小鼠熱水溫浴縮尾和福爾馬林致痛等藥效學(xué)實(shí)驗(yàn)，從另一角度提示了D4多肽具有靶向載藥膠束跨越血腦屏障的能力。
　　基于前期的實(shí)驗(yàn)結(jié)果，以及小膠質(zhì)細(xì)胞在血腦屏障中的結(jié)構(gòu)和功能特性，我們提出了D4多肽可能是通過(guò)與腦內(nèi)小膠質(zhì)細(xì)胞作用

3、的假設(shè)。在本論文研究中，首先我們以EPC/HSPC,Chol和DSPE-PEG2000，F(xiàn)ITC-DHPE/Dii為材料，制備了不同處方的空白熒光脂質(zhì)體和D4多肽修飾的靶向熒光脂質(zhì)體，利用差速震蕩法在大鼠乳鼠中分離得到原代小膠質(zhì)細(xì)胞，與熒光脂質(zhì)體共同孵育后，用流式細(xì)胞儀和共聚焦顯微鏡觀察空白與靶向熒光脂質(zhì)體與小膠質(zhì)細(xì)胞的體外結(jié)合情況，結(jié)果表明，HSPC脂質(zhì)體在含有2％D4多肽時(shí)與小膠質(zhì)細(xì)胞和星型膠質(zhì)細(xì)胞都有較好的結(jié)合；熒光共聚焦顯微鏡觀

4、察結(jié)果顯示，靶向脂質(zhì)體的結(jié)合明顯優(yōu)于非靶向脂質(zhì)體，并且靶向脂質(zhì)體與小膠質(zhì)細(xì)胞在0.5 h時(shí)就有很好的結(jié)合，與星型膠質(zhì)細(xì)胞在4h時(shí)有較好的結(jié)合，而與少突膠質(zhì)細(xì)胞的結(jié)合不明顯。
　　接著我們進(jìn)一步考察了D4脂質(zhì)體與小膠質(zhì)細(xì)胞在體內(nèi)的結(jié)合情況。尾靜脈注射3h后，利用磁珠分選方法分離出大腦中的小膠質(zhì)細(xì)胞，流式細(xì)胞儀檢測(cè)熒光脂質(zhì)體與小膠質(zhì)細(xì)胞在體內(nèi)的結(jié)合強(qiáng)弱，結(jié)果表明，D4多肽修飾的脂質(zhì)體與小膠質(zhì)細(xì)胞的結(jié)合與空白脂質(zhì)體與小膠質(zhì)細(xì)胞的結(jié)合有顯

5、著性差異。同時(shí)，為了進(jìn)一步觀察熒光脂質(zhì)體在腦組織中的分布，我們用免疫組化的方法，尾靜脈注射熒光脂質(zhì)體后2 h,4 h和10 h取出完整腦組織，冰凍切片，CD68標(biāo)記小膠質(zhì)細(xì)胞，DAPI染細(xì)胞核后，共聚焦顯微鏡下觀察結(jié)果顯示，4 h時(shí)D4多肽脂質(zhì)體開(kāi)始靠近小膠質(zhì)細(xì)胞，10 h時(shí)，D4多肽修飾的熒光脂質(zhì)體與小膠質(zhì)細(xì)胞完全結(jié)合，而非靶向脂質(zhì)體與小膠質(zhì)細(xì)胞沒(méi)有結(jié)合。
　　最后，本論文還考察了D4多肽修飾的阿霉素脂質(zhì)體在腦原位瘤中的藥效學(xué)。