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文檔簡介
1、第一部分大鼠局灶性腦缺血再灌注模型的建立
目的:應(yīng)用改良的MCAO線栓法制作大鼠局灶性腦缺血再灌注模型,并評價該模型的效果、穩(wěn)定性為后繼實驗奠定基礎(chǔ)。方法:將3-0尼龍線插入CCA內(nèi),并不斷調(diào)整栓塞線進入的角度使其順利進入ICA,前端到達大腦前動脈的起始部,通過阻斷大腦中動脈的血供而造成大腦中動脈供血區(qū)腦缺血,栓塞線進入深度約(20±3)mm。并應(yīng)用TTC染色及神經(jīng)功能學(xué)評分評估大鼠局灶性腦缺血再灌注模型的效果及穩(wěn)定性。結(jié)
2、果:造模成功者一般狀況較差,TTC染色發(fā)現(xiàn)梗塞灶明顯、穩(wěn)定性好,變異較小。除少數(shù)動物造模死亡外,其余神經(jīng)功能學(xué)評分都在1~3分之間。結(jié)論:改良的MCAO線栓模型創(chuàng)傷??;實驗結(jié)果穩(wěn)定、可重復(fù)性強,為腦缺血再灌注實驗提供有力保障。
第二部分大鼠腦缺血再灌注后tau蛋白異常高度磷酸化
目的:探討局灶性腦缺血再灌注后大鼠皮質(zhì)神經(jīng)元tau蛋白磷酸化的變化,以闡明腦梗死和阿爾茨海默病間的關(guān)系。方法:制作局
3、灶性腦缺血再灌注模型,應(yīng)用免疫印跡法檢測局灶性腦缺血再灌注后大鼠頂葉皮質(zhì)tau蛋白在Ser199/202、Ser396、Ser404和Thr231位點磷酸化和非溶性磷酸化tau蛋白的變化。結(jié)果:腦缺血再灌注6h后皮質(zhì)tau蛋白在Ser199/202、Ser396、Ser404和Thr231位點發(fā)生異常高度磷酸化,非溶性磷酸化tau蛋白顯著增加。結(jié)論:腦缺血再灌注后發(fā)生阿爾茨海默病樣病理變化,腦梗死可能促進阿爾茨海默病的發(fā)生、發(fā)展。
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第三部分 JNK在大鼠腦缺血再灌注后tau蛋白異常高度磷酸化和神經(jīng)細(xì)胞凋亡中的作用
目的:探討JNK在局灶性腦缺血再灌注后大鼠皮質(zhì)神經(jīng)元的tau蛋白過度磷酸化和bcl-2、bax的表達中的作用,以及腦缺血再灌注損傷后異常過度磷酸化的tau蛋白和bax的空間關(guān)系并檢測阻斷JNK的活性后對腦缺血再灌注后梗塞灶體積的影響,進一步闡明JNK在腦缺血損傷后tau蛋白磷酸化和神經(jīng)細(xì)胞凋亡中的作用。方法:制作局
5、灶性腦缺血再灌注模型,應(yīng)用免疫印跡檢測JNK的活性變化以及應(yīng)用其特異性阻斷劑SP600125阻斷JNK的活性后大鼠頂葉皮質(zhì)tau蛋白在Ser396和Thr231、Ser199/202、Ser404位點磷酸化的變化;免疫熒光雙標(biāo)法分別檢測腦缺血再灌注后bax的表達和磷酸化tau蛋白的關(guān)系,應(yīng)用TTC法檢測SP600125對梗塞灶體積的影響。結(jié)果:腦缺血再灌注損傷后JNK的活性增加,應(yīng)用SP600125阻斷JNK的活性后顯著抑制腦缺血再灌注
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