環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增技術(shù)對(duì)外源轉(zhuǎn)基因成分檢測(cè)及其協(xié)同驗(yàn)證.pdf

1、近些年來(lái)轉(zhuǎn)基因食品的安全性問(wèn)題受到了社會(huì)各界的廣泛關(guān)注，因此國(guó)家對(duì)轉(zhuǎn)基因食品安全的監(jiān)管力度也在逐步加強(qiáng)。目前對(duì)轉(zhuǎn)基因食品的檢測(cè)，除了常規(guī)的單靶標(biāo)核酸檢測(cè)外，還包括對(duì)多靶標(biāo)目的基因進(jìn)行篩選檢測(cè)和分析。隨著技術(shù)的不斷發(fā)展和進(jìn)步，轉(zhuǎn)基因食品的檢測(cè)技術(shù)也正向著快速、精確、高通量的檢測(cè)方向發(fā)展。
　　常規(guī)的轉(zhuǎn)基因食品檢測(cè)方法主要是聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(Polymerase Chain Reaction, PCR)技術(shù)、實(shí)時(shí)熒光定量技術(shù)，但這些轉(zhuǎn)基

2、因檢測(cè)技術(shù)都需要精密復(fù)雜的溫度循環(huán)儀器而且檢測(cè)時(shí)間比較長(zhǎng)，這樣就極大限制了它們?cè)诂F(xiàn)場(chǎng)或者田間快速檢測(cè)的推廣和應(yīng)用。但近些年等溫核酸擴(kuò)增技術(shù)得到了快速的發(fā)展，其中環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增技術(shù)(Loop-mediated IsothermalAmplification, LAMP)憑著特異性和靈敏度高、簡(jiǎn)單高效、所需儀器簡(jiǎn)單等的優(yōu)勢(shì)在細(xì)菌、病毒、轉(zhuǎn)基因食品等領(lǐng)域得到了廣泛的應(yīng)用。
　　本研究選擇了轉(zhuǎn)基因糧油原料中常見(jiàn)的3種外源轉(zhuǎn)基因成分，利用環(huán)

3、介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增方法對(duì)其外源轉(zhuǎn)基因成分進(jìn)行檢測(cè)。根據(jù)這3種常見(jiàn)外源轉(zhuǎn)基因成分(CP4 epsps，Pat，NPTⅡ)的基因序列，設(shè)計(jì)特異性的環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增(LAMP)引物，優(yōu)化反應(yīng)體系，并通過(guò)在擴(kuò)增產(chǎn)物中加入SYBR GreenⅠ(1000×)熒光染料，建立了可視化的環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增檢測(cè)方法。
　　實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，本研究建立的環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增方法對(duì)這3種外源轉(zhuǎn)基因成分(CP4 epsps，Pat，NPTⅡ)檢測(cè)的特異性高，靈敏度強(qiáng)，檢測(cè)限基